一、A preliminary study on functional domains of small heat shock protein Hsp16.3（论文文献综述）
陈龙[1]（2018）在《基于转录组测序的沙葱萤叶甲成虫夏滞育分子机理的研究》文中研究指明沙葱萤叶甲Galeruca daurica（Joannis）是近年来在内蒙古草原上猖獗成灾的一种新害虫,以成虫滞育越夏,以卵滞育越冬。滞育在提高昆虫生存能力方面扮演着重要角色,但目前对沙葱萤叶甲滞育的机理还一无所知。本研究利用RNA-Seq技术对沙葱萤叶甲成虫滞育前期（pre-diapause）、滞育期（diapause）和滞育后期（post-diapause）3个阶段进行了转录组测序,筛选了滞育相关基因,并对3个滞育相关基因的分子特性与表达谱进行了研究。同时,测定了成虫滞育不同阶段主要生理生化指标,以期揭示沙葱萤叶甲成虫夏滞育的分子机理,为进一步揭示其成灾机制及综合治理提供必要的基础。主要研究结果如下:1.明确了沙葱萤叶甲成虫滞育不同阶段主要生理生化指标的变化特点。在滞育前后水分和总蛋白含量较高,滞育期间含量较低,说明沙葱萤叶甲成虫滞育期间代谢活动较低;而脂肪和糖原含量的趋势与之相反,说明脂肪和糖原是沙葱萤叶甲成虫滞育期间的主要能源物质。海藻糖含量在滞育不同阶段波动较大,海藻糖含量的高低与沙葱萤叶甲在滞育不同阶段的能量需求及转换有密切关系。2.利用Illumina HiSeq2500测序平台,组装得到82,292个Unigenes。通过比对滞育前期-滞育期,共发现差异基因3,099个,主要富集于新陈代谢、碳水化合物代谢和脂肪代谢等分子功能类别;滞育期-滞育后期比对时,则发现81个差异基因,主要富集于脂肪生物合成、脂肪代谢调控和细胞脂肪代谢等分子功能类别。为了验证RNA-Seq数据,选取11个特异性表达基因进行qRT-PCR验证。结果显示,qRT-PCR和RNA-Seq结果表达趋势一致。3.海藻糖酶（trehalase,Tre）作为昆虫体内海藻糖代谢的关键性酶,在昆虫能量调节和生长发育中具有重要作用。通过RACE技术,克隆获得1条沙葱萤叶甲可溶性海藻糖酶（GdTre1）基因序列。该基因cDNA全长1,933 bp,其中ORF长1,704bp,共编码567个氨基酸;蛋白预测分子量66.56 kD,等电点6.62;编码蛋白具有海藻糖酶超基因家族典型的功能结构域,包含1条信号肽,不具有跨膜结构。同源序列比对和系统发育分析表明,GdTre1与马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata Tre1b的同源性最高,氨基酸序列一致性达70.25%。qRT-PCR检测结果表明,GdTre1在沙葱萤叶甲各发育阶段均有表达,其中在卵期和成虫滞育期间高表达,而在幼虫、预蛹、蛹及成虫滞育前低表达;在成虫不同组织中,通常在腹部表达量最高,其次为胸部,最低为头部;GdTre1表达量随着温度升高而上升,30℃达最高值,而后随温度升高略有下降。沙葱萤叶甲不同日龄成虫体内GdTre1表达量及Tre活性均存在显着差异,且GdTre1表达量与Tre活性变化趋势一致。以上结果表明,海藻糖酶与沙葱萤叶甲生长发育和成虫夏滞育有密切关系,该结果为进一步揭示昆虫夏滞育的分子机理提供了必要的基础。4.热激蛋白（heat shock poteins,Hsps）是一种生物体细胞在外界不利环境条件刺激下诱导产生的一种蛋白质。Hsps被认为是与滞育关系最为密切的基因。通过RACE技术,克隆得到沙葱萤叶甲热激蛋白10基因（GdHsp10a）的cDNA序列。序列分析表明,GdHsp10a基因的cDNA全长为526 bp,其中ORF为333 bp,编码110个氨基酸,预测蛋白分子量11.97 kD,等电点9.74;无信号肽,不含跨膜结构。多重序列比对及系统进化分析结果表明,GdHsp10a与光肩星天牛Anoplophora glabripennis亲缘关系最近,氨基酸序列一致性为53.15%。qRT-PCR结果显示,GdHsp10a基因在沙葱萤叶甲各发育阶段均有表达,其中在卵期和成虫期的表达量显着高于幼虫期、预蛹期及蛹期;成虫羽化第25 d时表达量最高,其次为100、10和7 d;温度对GdHsp10a表达量有显着影响,30℃条件下表达量最高,其次为35℃,15、20、25及40℃条件下表达量最低且无显着差异。上述结果表明,GdHsp10a可能在沙葱萤叶甲生长发育及成虫夏滞育中起着多重作用,本研究为进一步研究该基因的功能奠定了基础。5.保幼激素（juvenile hormone,JH）在昆虫滞育的调控中扮演着重要角色。保幼激素结合蛋白（juvenile hormone binding protein,JHBP）在JH的保护和运输中具有重要作用。通过RACE技术,克隆得到沙葱萤叶保幼激素结合蛋白（GdJHBP）基因的cDNA序列。cDNA全长826 bp,其中ORF为714 bp,共编码237个氨基酸;蛋白质预测分子量26.58 kD,等电点4.37;编码蛋白具有JHBP超基因家族典型的功能结构域,发现1条信号肽,无跨膜区。同源序列比对和系统发育分析结果表明,GdJHBP与同为鞘翅目的马铃薯甲虫JHBP 3p2亲缘关系最近,氨基酸序列一致性为30%。qRT-PCR检测结果表明,GdJHBP在沙葱萤叶甲卵期、蛹期低表达,而在幼虫期及成虫期高表达;在成虫不同组织中,在腹部和胸部表达量最高,其次是头部;温度显着影响GdJHBP基因的表达,35℃时表达量最高,而后下降。以上结果表明,GdJHBP蛋白在沙葱萤叶甲的生长发育和夏滞育中发挥着重要作用,该结果为进一步揭示昆虫夏滞育的分子机理提供了必要的基础。
廖怡[2]（2018）在《苦参功能基因RPS13s和HSP17.8的克隆、表达以及蛋白功能初步分析》文中认为苦参为清热燥湿的传统中药材,其主要化学活性成分:苦参碱、氧化苦参碱和黄酮类已呈现较好的临床应用前景,现今广泛用于临床治疗慢性病毒性肝炎、女性阴道炎症及人类各种癌症。已知核糖体蛋白和热应激蛋白分别对维持植物的正常生命活动和减轻逆境胁迫引起的伤害有着非常重要的作用,因此本实验对苦参核糖体蛋白S13（Ribosomal Protein S13,RPS13）和热应激蛋白（Heat Shock Protein,HSP）HSP17.8进行了克隆、体外表达并分析了这些蛋白的理化性质、结构特点及生物学功能。目的:克隆常用中药苦参中重要的功能基因:RPS13基因和HSP17.8基因,并在体外诱导其表达相应的目的蛋白,系统地分析目的蛋白的物理化学性质、二级结构、三级结构等生物学信息,初步探讨苦参这两类蛋白的结构和功能。方法:基于苦参转录组分析获得的Unigene数据,利用Primer Premier 5.0软件设计特异性扩增引物,提取苦参总RNA并用酶标仪和1%的琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的纯度和完整性。利用RT-PCR法对RPS13基因和HSP17.8基因的开放阅读框进行扩增,将扩增片段与pMD19-T Vector进行连接,用双酶切法（Nde I/Xho I）、菌液PCR法及测序法对重组质粒进行验证。将双酶切后回收的扩增片段与pET22b（+）Vector进行连接,同样用双酶切法（Nde I/Xho I）、菌液PCR法及测序法对重组质粒进行鉴定。系统地对RPS13和HSP17.8进行生物学信息分析,目的蛋白用不同浓度的IPTG诱导剂在不同温度、时间下诱导,最后用western blot分析苦参RPS13和HSP17.8的表达水平。结果:（1）总RNA提取结果:OD260nm/OD280nm比值为1.92、1%的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示RNA的28S rRNA、18S rRNA、5S rRNA三个条带均清晰可见。（2）RT-PCR实验结果为:三个RPS13 PCR结果显示在分子量为500 bp左右出现明亮条带（理论分子量为456 bp）;同样地,HSP17.8 PCR结果显示在分子量为500 bp左右出现明亮条带（理论分子量为501 bp）。（3）双酶切（Nde I/Xho I）、菌液PCR及测序结果:三个RPS13双酶切结果和菌液PCR结果显示在分子量为500 bp左右处均出现清楚的目的条带,测序结果用DNAssist软件比对发现与原来转录组数据里的序列一致;同样地HSP17.8的双酶切结果和菌液PCR结果也显示在分子量为500 bp左右处均出现清楚的目的条带,测序结果用DNAssist软件比对发现也与原来转录组数据里的序列一致。（4）重组表达载体构建后,双酶切（Nde I/Xho I）、菌液PCR及测序结果正确。（5）生物信息学分析结果显示:三个RPS13均属于不稳定蛋白,理论分子量约为17.2 KD,苦参与油棕树的RPS13亲缘关系最近,三级结构预测表明苦参三个RPS13蛋白的N末端有4个α螺旋,C末端有3个α螺旋,这两簇α螺旋通过长的无规卷曲连接。HSP17.8属于稳定蛋白,理论分子量约为17.8 KD,苦参与羽扇豆的HSP17.8的亲缘关系最近,三级结构预测表明苦参HSP17.8的4个α螺旋和5个β折叠形成了β1-α1-β2-α2-β3-α3-β4-α4-β5的折叠方式,5个β折叠相同方向,被α螺旋包裹在内部,构成了蛋白质立体结构的内部框架。（6）Western blot技术检测苦参RPS13和HSP17.8的表达水平,结果显示:16℃、0.5 mmol/L IPTG,24 h为RPS13-1的最佳表达条件;25℃、1 mmol/L IPTG,8 h为RPS13-2的最佳表达条件;25℃、0.1 mmol/L IPTG,8 h为RPS13-3的最佳表达条件;25℃、0.5 mmol/L IPTG,8 h为HSP17.8的最佳表达条件。结论:本研究首次从苦参中成功克隆RPS13s和HSP17.8基因开放阅读框,并在体外得到了表达。分析了RPS13s和HSP17.8的理化性质、进化关系、二级和三级结构特点,为进一步研究该蛋白的结构、功能奠定了实验基础。
梁晶晶[3]（2017）在《BAG3抑制埃博拉病毒和马尔堡病毒VLP出芽及其机制探索》文中进行了进一步梳理埃博拉病毒属（ebolavirus,EBOV）与马尔堡病毒属（marburgvirus,MARV）同属于丝状病毒科（filoviridae）,能够导致人类与灵长类动物的严重病毒性出血热,是感染死亡率极高的人兽共患病病原。目前尚没有公认的疫苗或药物能够确实地预防和治疗EBOV和MARV的感染。2014-2016年中非、西非国家暴发的严重埃博拉疫情及一些欧美国家的零星散发病例使得这一致命病原再次受到广泛关注。丝状病毒对全球公共卫生安全的威胁不断,深入探索该病毒生物学特性与致病机理的重要性尤为凸显。病毒侵入细胞进行复制循环后,子代病毒需要从宿主细胞释放,进而感染其他细胞而进行传播。丝状病毒的出芽释放是病毒生命周期的重要阶段,也是其传播、致病的必要环节。本研究旨在了解与阐明哪些宿主蛋白、哪些细胞进程（正/负）调控了丝状病毒EBOV、MARV病毒粒子的出芽释放过程。丝状病毒基质蛋白VP40是负责病毒粒子装配与出芽的关键成分,在哺乳动物细胞中,该蛋白能够独立地装配成形态上与感染性病毒粒子相似的病毒样颗粒（Virus like particle,VLP）,并模拟活病毒出芽的方式从细胞中释放。丝状病毒EBOV与MARV的VP40蛋白介导的自我装配为VLP并出芽释放的这一特性,为深入了解病毒出芽机制提供了可靠的研究手段。VP40蛋白的晚期出芽结构域（Late budding domain,L-domain）是介导VLP与病毒粒子出芽的关键功能区域。PPxY、P（T/S）AP、YPx（n）L等由4个（及以上）氨基酸残基构成的“基序”（motif）为L-domain的重要功能元件。L-domain基序能够与不同的宿主蛋白结合,“挟持”这些蛋白与相关的宿主细胞机制来共同完成病毒的出芽释放。EBOV和MARV的VP40蛋白均携带L-domain基序PPxY,该基序为WW domain的典型配体之一,而WW domain是广泛存在于宿主蛋白上的、介导蛋白间相互作用的功能模块。因此,VP40蛋白能够通过PPxY基序与携带WW domain的宿主蛋白结合。例如,VP40 PPxY基序通过结合HECT E3泛素连接酶Nedd4和ITCH蛋白的WW domain而对它们进行招募,介导自身的泛素化并促进病毒粒子和VLP的出芽。为了鉴定出更多的、能够与VP40 PPxY基序结合的、含WW domain的宿主蛋白,本研究首先构建了由115个蛋白WW domain组成的PPxY“脯氨酸富集”基序阅读阵列,利用含EBOV VP40 L-domain基序的肽段“扫描”该阵列,成功鉴定出多个能够与PPxY基序发生特异性反应的宿主蛋白WW domain,如 Bcl-2 相关永生基因 3（Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3）蛋白。本研究利用GST-Pulldown与免疫共沉淀等方法验证了 BAG3蛋白与EBOV、MARVVP40蛋白在体外及细胞内的相互结合,并通过突变体实验证实该相互作用依赖于BAG3的WWdomain与VP40的PPxY基序之间的相互作用机制。EBOV VP40 L-domain基序在“PPxY”阅读阵列中只能结合部分宿主蛋白WW domain,说明PPxY—WW domain的相互作用同时具备特异性与选择性。由于VP40蛋白的关键功能是介导病毒粒子出芽,本研究为评估BAG3—VP40间高度选择性和特异性的相互作用可能具有的特定生物学意义,利用了 VLP出芽实验测定BAG3对VP40出芽过程的影响。结果发现,BAG3蛋白能够以剂量依赖性的方式抑制VP40所介导的VLP出芽,降低细胞内源性的BAG3蛋白表达能够增加VLP的产量。BAG3与之前鉴定的全部含WW domain宿主蛋白不同,它并非被VP40“挟持”来促进病毒的出芽,而是表现出抑制病毒出芽的能力。BAB3的抑制出芽功能也需要依赖PPxY—WW domain之间的相互作用。实验还证实,BAG3能够阻碍携带EBOV VP40 L-domain基序的感染性重组病毒VSV-M40从细胞中释放,说明BAG3对出芽的负调控不仅作用于VLP的出芽,也能够抑制感染性病毒粒子的出芽释放。BAG3是共-分子伴侣蛋白BAG家族的成员,能够调节多种关键的细胞生理进程。作为一种细胞压力应激诱导的促细胞存活蛋白,BAG3具有抗细胞凋亡与促细胞自噬的活性,参与分子伴侣相关的选择性自噬（selective autophagy）进程,能够将错误折叠蛋白或外源蛋白扣押入细胞聚集体（aggresome）中,利于下游自噬—溶酶体系统对这些靶标蛋白进行降解,协助维持细胞内蛋白稳态。为了探明BAG3通过何种机制抑制VP40介导的VLP出芽,本研究通过活细胞共聚焦显微镜成像实验,发现BAG3能够显着改变VP40在细胞内的定位,导致VP40不能聚集到细胞外缘区域,无法形成胞膜突触。利用细胞组分分离技术与双染色间接免疫荧光实验,证实BAG3能够将VP40滞留在细胞浆内,阻止VP40定位到细胞膜上的出芽位点,从而抑制VP40所介导的VLP装配与出芽。最关键的是,BAG3能够导致一部分的VP40蛋白扣押在细胞核周边区域的聚集体中,该聚集体携带细胞自噬体的标志蛋白LC3-Ⅱ,表明BAG3的促细胞自噬和分子伴侣相关选择性自噬活性参与了对VLP出芽的抑制机制。实验还证实,BAG3可以竞争性地阻碍VP40与其他促病毒出芽的WWdomain宿主蛋白（如Nedd4、ITCH）的结合,这一特性也可能参与了 BAG3对VLP出芽的负调控机制。综上所述,本研究成功鉴定出BAG3蛋白为丝状病毒EBOV与MARV VP40的互作宿主蛋白,能够抑制VP40VLP的出芽和感染性重组病毒的释放。作为首个被发现能够与VP40互作并负调控病毒出芽过程的WW domain宿主蛋白,BAG3的表达显着改变VP40的细胞内定位,利用自身的细胞自噬相关活性将部分VP40扣押在细胞聚集体中,阻止VP40定位到细胞膜上的出芽位点,并竞争性阻碍VP40与促病毒出芽的WW domain宿主蛋白结合,阻断VP40介导的VLP出芽过程。这些结果显示,BAG3可能代表了一种新的、特异的宿主防御策略,抑制丝状病毒VP40蛋白的功能,阻断病毒出芽及病毒传播扩散。
李响[4]（2010）在《中国卤虫β-catenin基因的序列分析，功能研究及在不同发育时期的表达》文中进行了进一步梳理中国卤虫（Artemia sinica）属于节肢动物门（Phylum Arthropoda）,甲壳纲（Class Crustacea）,鳃足亚纲（Subclass Branchiopoda）,无甲目（Order Anostaca）,卤虫科（Family Artemiidae）,卤虫属（Genus Artemia）。卤虫广泛分布于盐湖、盐井等高盐水体中。因其富含高蛋白和不饱和脂肪酸等丰富的营养物质,因此成为重要的经济饵料。β-catenin基因是一个在Wnt通路中的非常重要的基因。本研究发现,在卤虫发育的不同阶段,β-catenin基因的表达量有着明显的变化。在胚胎发育的早期,β-catenin基因表达量较高,这于生命活动旺盛,细胞通路间进行物质和信息传递密切相关。另外,卤虫的滞育卵是暂停发育的原肠胚,这与其他生物的胚胎发育显着不同。卤虫胚胎发育基因的鉴别及功能研究对于胚胎暂停及重新启动的基因调控机制研究有重要意义。本研究首次采用RACE技术获得了2826bp的卤虫β-catenin基因的cDNA全序列,经Omiga2.0和若干在线分析网站的分析,不仅确定该序列为卤虫β-catenin基因（GenBank accession No. : GU289917.1）,而且研究了其许多生物学特征。同时,利用实时定量荧光PCR技术以不同时期卤虫的cDNA为模板进行QRT-PCR,发现β-catenin基因在胚胎发育早期,表达量较高,但随着时间的推移,表达量逐渐降低。同样,采用实时荧光定量PCR技术,也发现了菌刺激和高盐度都会对β-catenin基因的表达产生影响。表明中国卤虫β-catenin基因也与多种基因的表达有关。β-catenin基因作为Wnt通路的核心可能也参与调控了其他胚胎发育相关基因表达。整体免疫组化结果则说明了β-catenin基因不光与多种胚胎发育相关基因有关,而且它还与细胞黏附作用以及调节细胞周期的重要作用。
任长虹,张成岗[5]（2008）在《秀丽线虫:低氧应答研究的模式生物》文中研究说明低氧能够引起秀丽线虫发生相应的生理和行为学变化,并可保护机体免受缺氧损伤。秀丽线虫的低氧诱导因子（HIF-1）的恒定性调控通路和人类的相应通路之间具有高度保守性,因此秀丽线虫也已成为研究低氧应答调控通路进化保守性的重要工具之一。阐明秀丽线虫的低氧应答机制将为了解人类低氧相关疾病的发病机制提供有价值的线索。
张仕蓉[6]（2007）在《软骨发育不全和先天性白内障家系的分子遗传学研究》文中研究说明本论文包括两个部分:一是应用突变检测,对一中国常染色体显性软骨发育不全家系进行致病基因新突变位点的检出;二是对一中国常染色体显性先天性白内障家系进行全基因组扫描,应用连锁分析,定位该家系中致病基因。（1）软骨发育不全（ACH）是最常见的一种由成纤维生长因子受体3（FGFR3）突变引起的,呈常染色体显性遗传的侏儒畸形。超过98%的ACH主要是由位于跨膜区的单个氨基酸G380R替换导致的。而与ACH有关的其他FGFR3突变也偶有报道。对一个软骨发育不全家系进行分析,提取家庭成员的血样,对FGFR3基因编码的外显子以及外显子和内含子的交界区进行序列分析,发现突变并通过限制性片断长度多态性（RFLP）分析对致病突变进行验证。我在这个中国软骨发育不全家系中发现了一新的FGFR3错义突变,第649个核苷酸A颠换为T,使得位于第二个免疫球蛋白类似结构域中高度保守的S217被半胱氨酸替换。RFLP分析显示Ser217Cys突变与患者共遗传,但并不存在于家系中的正常成员以及200个正常对照中。这些实验结果证明Ser217Cys突变是导致这个ACH家系的病因,这是第一个在FGFR3第二个免疫球蛋白类似结构域中发现的和ACH有关的突变。（2）先天性白内障是一种严重的致盲性晶状体疾病,是由于胚胎期晶状体代谢异常而导致其自身透明度下降的疾病,是人类致盲的主要原因之一,并具有明显的临床和基因异质性。我们收集了一个四代患有先天性白内障的中国家系,提取了22个家系成员的DNA样本进行全基因组连锁分析。通过构建单倍型,计算两点LOD值和多点LOD值确定与疾病共分离区间。我们将这一家系的致病基因定位在20p12-20p11（D20s915-D20s912） ,大小7.54Mb（12.49cM）的区域内,其中Marker D20s471（θ=0）具有最大两点LOD值5.15。对该区域内在与晶状体结构密切相关的BFSP1进行测序分析后未有突变发现。本研究为进一步发现该20p染色体位点白内障致病基因奠定了基础。
二、A preliminary study on functional domains of small heat shock protein Hsp16.3（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、A preliminary study on functional domains of small heat shock protein Hsp16.3（论文提纲范文）
（1）基于转录组测序的沙葱萤叶甲成虫夏滞育分子机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语表 |
| 1 前言 |
| 1.1 沙葱萤叶甲 |
| 1.1.1 沙葱萤叶甲的发生危害 |
| 1.1.2 沙葱萤叶甲形态及生物学特性 |
| 1.1.3 沙葱萤叶甲国内外研究进展 |
| 1.2 昆虫滞育研究进展 |
| 1.2.1 滞育概述 |
| 1.2.2 滞育类型 |
| 1.2.3 外界环境对于昆虫滞育的影响 |
| 1.2.4 滞育昆虫的生理生化特点 |
| 1.2.5 滞育调控机理 |
| 1.3 转录组学 |
| 1.3.1 转录组学概述 |
| 1.3.2 转录组学在昆虫滞育研究中的应用 |
| 1.4 本研究的目的意义、主要内容及技术路线 |
| 1.4.1 目的意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 2 沙葱萤叶甲成虫夏滞育不同阶段糖类、蛋白及脂肪含量的变化 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 沙葱萤叶甲脂肪及含水量的测定 |
| 2.2.2 沙葱萤叶甲体内总糖、海藻糖和糖原含量测定 |
| 2.2.3 总蛋白含量测定 |
| 2.2.4 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 沙葱萤叶甲成虫不同滞育阶段的含水量和脂肪含量 |
| 2.3.2 沙葱萤叶甲成虫不同滞育阶段的总糖、海藻糖及糖原含量 |
| 2.3.3 沙葱萤叶甲成虫不同滞育阶段的总蛋白含量 |
| 2.4 讨论 |
| 3 沙葱萤叶甲成虫夏滞育的转录组学研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验样品的收集和储存 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 |
| 3.1.3 实验引物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 供试材料总RNA的提取 |
| 3.2.2 转录组测序 |
| 3.2.3 生物信息学分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 测序结果与序列组装 |
| 3.3.2 mRNA片段化随机性检测 |
| 3.3.3 插入片段长度检测 |
| 3.3.4 转录组测序数据饱和度检测 |
| 3.3.5 Unigene注释 |
| 3.3.6 不同滞育阶段基因表达谱分析 |
| 3.3.7 差异基因GO、KEGG富集分析 |
| 3.3.8 定量验证 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 滞育相关基因分析 |
| 3.4.2 热激蛋白 |
| 3.4.3 新陈代谢 |
| 3.4.4 能量储存与代谢 |
| 3.4.5 细胞骨架 |
| 4 沙葱萤叶甲海藻糖酶基因GdTre1的克隆、分子特性和表达分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 供试材料 |
| 4.1.2 主要试剂与仪器 |
| 4.1.3 RNA的提取及cDNA第1链的合成 |
| 4.1.4 海藻糖酶基因中间片段的克隆 |
| 4.1.5 海藻糖酶基因cDNA5′和3′RACE扩增及全长基因的获取 |
| 4.1.6 海藻糖酶基因的生物信息学分析 |
| 4.1.7 沙葱萤叶甲海藻糖酶基因的表达谱分析 |
| 4.1.8 海藻糖酶活性测定 |
| 4.1.9 数据统计与分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 沙葱萤叶甲海藻糖酶基因的克隆及序列分析 |
| 4.2.2 GdTre1的同源比对和系统发育关系分析 |
| 4.2.3 GdTre1在沙葱萤叶甲不同发育阶段的表达分析 |
| 4.2.4 GdTre1在沙葱萤叶甲不同日龄成虫组织中的表达分析 |
| 4.2.5 温度胁迫对GdTre1表达的影响 |
| 4.2.6 沙葱萤叶甲不同日龄成虫中海藻糖酶活性的测定 |
| 4.3 讨论 |
| 5 沙葱萤叶甲热激蛋白基因GdHsp10a的克隆、分子特征与表达分析 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 供试材料 |
| 5.1.2 主要试剂与仪器 |
| 5.1.3 RNA的提取及cDNA第1链的合成 |
| 5.1.4 GdHsp10a基因中间片段的克隆 |
| 5.1.5 GdHsp10acDNA5'和3'RACE扩增及全长基因的获取 |
| 5.1.6 GdHsp10a的生物信息学分析 |
| 5.1.7 GdHsp10a基因qRT-PCR定量分析 |
| 5.1.8 数据统计与分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 沙葱萤叶甲GdHsp10a基因的克隆及序列分析 |
| 5.2.2 生物信息学分析 |
| 5.2.3 Gdhsp10a的同源比对和系统发育关系分析 |
| 5.2.4 Gdhsp10a在沙葱萤叶甲不同发育阶段的表达分析 |
| 5.2.5 Gdhsp10a在沙葱萤叶甲不同日龄成虫组织中的表达分析 |
| 5.2.6 GdHsp10a在不同温度下的表达分析 |
| 5.3 讨论 |
| 6 沙葱萤叶甲保幼激素结合蛋白GdJHBP基因的克隆、分子特性和表达分析 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 主要试剂与仪器 |
| 6.1.3 RNA的提取及cDNA第1链的合成 |
| 6.1.4 GdJHBP基因序列的筛选及验证 |
| 6.1.5 GdJHBP基因cDNA5′和3′RACE扩增及全长基因序列的获取 |
| 6.1.6 GdJHBP基因的生物信息学分析 |
| 6.1.7 GdJHBP的表达谱分析 |
| 6.1.8 数据统计与分析 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 沙葱萤叶甲GdJHBP基因的克隆及生物信息学分析 |
| 6.2.2 GdJHBP的同源性比对及系统发育关系分析 |
| 6.2.3 GdJHBP在沙葱萤叶甲不同发育阶段的表达分析 |
| 6.2.4 GdJHBP在沙葱萤叶甲不同日龄成虫的组织中的表达分析 |
| 6.2.5 GdJHBP在高温胁迫下的表达分析 |
| 6.3 讨论 |
| 7 全文总结 |
| 7.1 主要结果 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 研究展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（2）苦参功能基因RPS13s和HSP17.8的克隆、表达以及蛋白功能初步分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 苦参三个RPS13的基因克隆与原核表达 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 三个RPS13基因的克隆 |
| 2.2 三个RPS13的生物信息学分析 |
| 2.3 三个RPS13的诱导表达 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 三个RPS13基因的克隆结果 |
| 3.2 生物信息学分析结果 |
| 3.2.1 序列比对与分析 |
| 3.2.2 蛋白物理化学性质分析 |
| 3.2.3 蛋白基元和结构域分析 |
| 3.2.4 同源蛋白的进化树分析 |
| 3.2.5 二级结构预测和3D结构模拟 |
| 3.3 三个RPS13的诱导表达结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 苦参热应激蛋白HSP17.8的基因克隆与原核表达 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 HSP17.8基因的克隆 |
| 2.2 HSP17.8的生物信息学分析 |
| 2.3 HSP17.8的诱导表达 |
| 2.4 HSP17.8的纯化 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HSP17.8基因的克隆结果 |
| 3.2 生物信息学分析结果 |
| 3.2.1 序列比对与分析 |
| 3.2.2 蛋白物理化学性质分析 |
| 3.2.3 蛋白基元和结构域分析 |
| 3.2.4 同源蛋白比对与进化树分析 |
| 3.2.5 二级结构预测和3D结构模拟 |
| 3.3 HSP17.8的诱导表达结果 |
| 3.4 HSP17.8的纯化结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）BAG3抑制埃博拉病毒和马尔堡病毒VLP出芽及其机制探索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1. 丝状病毒研究概述 |
| 1.1.1. 丝状病毒流行病学 |
| 1.1.2. 丝状病毒感染的临床症状 |
| 1.1.3. 丝状病毒的种属分类 |
| 1.1.4. 丝状病毒的形态、基因组结构与病毒蛋白 |
| 1.2. 丝状病毒基质蛋白VP40与病毒出芽 |
| 1.2.1. VP40蛋白的构象与功能 |
| 1.2.2. VP40介导病毒出芽的工作模式 |
| 1.2.3. VP40蛋白的功能区域 |
| 1.2.4. Late budding domain |
| 1.2.5. 与VP40相互作用的促出芽宿主蛋白 |
| 1.3. ESCRT机制与病毒出芽 |
| 1.3.1. ESCRT机制概述 |
| 1.3.2. ESCRT与病毒出芽 |
| 1.4. 影响病毒出芽的其他病毒结构蛋白 |
| 1.5. 影响病毒出芽的其他宿主因素 |
| 1.5.1. 细胞骨架成分—肌动蛋白 |
| 1.5.2. 细胞质膜的磷脂丝氨酸水平 |
| 1.5.3. 钙离子通道 |
| 1.6. PPxY基序-WW domain相互作用 |
| 1.6.1. WW domain概述 |
| 1.6.2. PPxY—WW domain相互作用与病毒出芽 |
| 1.7. 丝状病毒出芽的抑制因素 |
| 1.7.1. 抑制丝状病毒出芽的宿主蛋白 |
| 1.7.2. 阻断丝状病毒出芽的小分子抑制剂 |
| 1.8. BAG3蛋白研究概述 |
| 1.8.1. BAG3蛋白的结构与功能 |
| 1.8.2. BAG3蛋白与病毒生命周期的联系 |
| 1.9. 细胞自噬与病毒生命周期 |
| 1.10. 研究目的与意义 |
| 第二章 BAG3与EBOV和MARV VP40相互作用及对VP40介导的病毒出芽的影响 |
| 2.1. 材料 |
| 2.1.1. 细胞 |
| 2.1.2. 病毒 |
| 2.1.3. 质粒 |
| 2.1.4. 抗体 |
| 2.1.5. 主要试剂 |
| 2.2. 方法 |
| 2.2.1. 脯氨酸富集(Proline rich)基序PPxY阅读阵列的构建与“扫描” |
| 2.2.2. 质粒的细菌转化 |
| 2.2.3. 蛋白的原核表达 |
| 2.2.4. 菌体蛋白的提取 |
| 2.2.5. 真核表达质粒的细胞转染 |
| 2.2.6. SDS-PAGE与Western blot |
| 2.2.7. GST-pulldown |
| 2.2.8. 免疫共沉淀 |
| 2.2.9. 病毒样颗粒VLP的收获与检测 |
| 2.2.10. siRNA的转染 |
| 2.2.11. 压制细胞内BAG3表达对VLP出芽的影响 |
| 2.2.12. VSV-M40重组病毒的感染 |
| 2.2.13. 病毒滴度的测定 |
| 2.3. 结果 |
| 2.3.1. “脯氨酸富集”PPxY基序阅读阵列的构建 |
| 2.3.2. BAG3 WW domain结合eVP40 PPxY基序 |
| 2.3.3. BAG3 WW domain在体外通过PPxY基序结合eVP40与mVP40 |
| 2.3.4. BAG3在细胞内结合eVP40和mVP40 |
| 2.3.5. WW domain是BAG3—VP40蛋白相互作用的必要条件 |
| 2.3.6. BAG3—VP40相互作用抑制VP40介导的病毒样颗粒出芽 |
| 2.3.7. BAG3通过剂量依赖的方式抑制VP40介导的VLP出芽 |
| 2.3.8. 压制细胞内源性BAG3的表达促进VP40 VLP的出芽释放 |
| 2.3.9. BAG3抑制感染性重组病毒VSV-M40的释放 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 BAG3调控VP40介导出芽过程的机制探索 |
| 3.1. 材料 |
| 3.1.1. 细胞 |
| 3.1.2. 病毒 |
| 3.1.3. 质粒 |
| 3.1.4. 抗体 |
| 3.1.5. 主要试剂 |
| 3.2. 方法 |
| 3.2.1. 活细胞成像 |
| 3.2.2. 细胞质与细胞膜蛋白组分的分离提取 |
| 3.2.3. 双染色间接免疫荧光实验 |
| 3.2.4. BAG3竞争性抑制VP40-Nedd4/ITCH结合实验 |
| 3.2.5. VSV-eGP重组病毒的感染 |
| 3.3. 结果 |
| 3.3.1. BAG3改变eVP40的细胞内分布定位 |
| 3.3.2. BAG3减少细胞膜上eVP40和mVP40蛋白的含量 |
| 3.3.3. BAG3阻碍eVP40蛋白向细胞膜聚集 |
| 3.3.4. BAG3导致eVP40蛋白被扣押入细胞内的聚集体中 |
| 3.3.5. BAG3竞争性阻碍eVP40与其他促出芽“WW”宿主蛋白的结合 |
| 3.3.6. 重组病毒VSV-eGP诱导细胞内BAG3表达上调 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（4）中国卤虫β-catenin基因的序列分析，功能研究及在不同发育时期的表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 卤虫的生物学研究 |
| 1.1.1 卤虫的生物学特征、生活习性和分布 |
| 1.2 卤虫胚胎发育相关基因的研究 |
| 1.2.1 胚胎发育相关基因介绍 |
| 1.2.2 β-catenin 基因相关研究工作 |
| 1.2.3 Wnt 信号通路研究 |
| 1.2.4 卤虫早期生物技术研究情况 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 卤虫孵化及培养条件 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 实验器材的处理 |
| 2.2.2 卤虫各时期总RNA 的提取 |
| 2.2.3 总RNA 模板的纯化 |
| 2.2.4 反转录 |
| 2.2.5 PCR 扩增 |
| 2.2.6 3’-5’RACE (Rapid-Amplification of cDNA Ends) |
| 2.2.7 整体免疫组化 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR |
| 2.3 生物信息学分析 |
| 2.3.1 序列分析 |
| 2.3.2 蛋白质基本性质分析 |
| 2.3.3 功能位点、功能域以及蛋白质的跨膜分析 |
| 2.3.4 系统进化树分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 β-catenin 基因扩增结果及序列分析 |
| 3.1.1 β-catenin 基因PCR 扩增结果及其验证 |
| 3.1.2 β-catenin 基因3’RACE 扩增结果 |
| 3.1.3 β-catenin 基因5’RACE 扩增结果 |
| 3.2 β-catenin 基因全cDNA 序列3’-5’RACE 结果分析 |
| 3.3 β-catenin 基因序列生物信息学分析 |
| 3.3.1 β-catenin 基因序列分析 |
| 3.3.2 β-catenin 的蛋白质序列分析 |
| 3.3.3 蛋白质活性位点、功能域以及蛋白质的跨膜分析 |
| 3.3.4 系统进化树分析 |
| 3.4 β-catenin 基因整体免疫组化 |
| 3.5 中国卤虫β-catenin 基因功能研究以及胚胎发育时期的表达量变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 β-catenin 基因序列分析 |
| 4.2 β-catenin 基因在中国胚胎发育时期的表达 |
| 4.3 β-catenin 基因与菌浓度和盐度的关系 |
| 4.4 实验条件的优化 |
| 4.4.1 总RNA 质量的优化 |
| 4.4.2 实时荧光定量PCR 的优化 |
| （1） 引物设计 |
| （2） Real Time PCR 相关试剂的选择 |
| 4.4.3 整体免疫组化条件优化 |
| 参考文献 |
| 攻读学位论文期间发表的文章 |
| 致谢 |
（6）软骨发育不全和先天性白内障家系的分子遗传学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 先天性软骨发育不全及FGFR3 分子研究概况 |
| 1.2 先天性白内障及其医学遗传学研究概况 |
| 2 一先天性软骨发育不全家系新FGFR3 突变的发现 |
| 2.1 患者、材料和方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 实验讨论 |
| 3 一中国先天性白内障家系新致病基因的定位 |
| 3.1 实验的技术路线 |
| 3.2 研究对象、材料与方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 实验讨论 |
| 4 总结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 |
四、A preliminary study on functional domains of small heat shock protein Hsp16.3（论文参考文献）
- [1]基于转录组测序的沙葱萤叶甲成虫夏滞育分子机理的研究[D]. 陈龙. 内蒙古农业大学, 2018(12)
- [2]苦参功能基因RPS13s和HSP17.8的克隆、表达以及蛋白功能初步分析[D]. 廖怡. 安徽中医药大学, 2018(02)
- [3]BAG3抑制埃博拉病毒和马尔堡病毒VLP出芽及其机制探索[D]. 梁晶晶. 广西大学, 2017(06)
- [4]中国卤虫β-catenin基因的序列分析，功能研究及在不同发育时期的表达[D]. 李响. 辽宁师范大学, 2010(05)
- [5]秀丽线虫:低氧应答研究的模式生物[J]. 任长虹,张成岗. 生理科学进展, 2008(01)
- [6]软骨发育不全和先天性白内障家系的分子遗传学研究[D]. 张仕蓉. 华中科技大学, 2007(05)