一、重视和加强显微镜下形态学检查（论文文献综述）
李韵冰[1]（2021）在《医学形态学实验教学显微镜使用现状和管理》文中认为光学显微镜是医学形态学实验教学中使用最广泛的仪器,但由于教师和学生对显微镜规范使用的重视程度不够,学生实验基础存在个体差异,教学安排进度不统一,教学条件限制等原因,导致学生在使用过程中出现很多错误操作。因此根据本校医学部实验中心的具体情况规范显微镜教学使用,建立标准的培训和考核体系,开展趣味性、探索性实验课程和活动,将有利于提高形态学实验教学质量,培养学生良好的实验习惯和延长显微镜设备的使用寿命。
张丽华,寻阳,曾煦欣,郭嘉亮[2]（2021）在《高校医药工程学院形态学实验室的安全管理》文中指出随着高校快速发展,学生人数的增多以及实验新旧设备的同时使用,给医药工程类实验室安全带来诸多新的挑战。本文重点讨论工程类院校中构建形态学实验室安全教育体系和安全管理体系,探索形态学实验室安全教育与管理路径,系统从安全教育、环境安全、水电安全、实验设备安全、教学过程安全、开放管理安全、信息化安全等方面阐述在实践工作中累积的一些经验和探索。形态学实验室安全教育是医药工程学院实验室安全管理的重要内容,要从多方面入手,针对性地开展安全教育,构建有效的实验室安全管理体系。
钱香,杨淑娴,王敏,任真[3]（2021）在《尿液形态学检验教学中存在的问题和对策》文中指出尿液形态学检验是临床诊断筛查多种疾病的重要手段,也是实习生带教内容中的难点。随着现代化技术高速发展,人们对自动化仪器过度依赖而忽略了形态学检验的重要性。教师使用的带教方式单一,学生学习积极性不高,收获甚少。针对此种情况,提出改进方法:（1）全面规范带教工作,通过定期考核培训提升带教教师专业水平;（2）改善教学方法,如运用显微数码互动系统和网络平台使形态学教学更加高效,打造趣味实验调动学生学习积极性;（3）鼓励学生参与案例讨论、形态学竞赛,提高师生对形态学检验的重视程度。
寇瑶[4]（2021）在《3nm氧化铁纳米颗粒对斑马鱼胚胎发育的毒性作用机制的研究》文中研究表明氧化铁纳米颗粒（ferric oxide nanoparticles,FeNPs）在生物医药领域具有广阔的应用前景,可作为药物载体、分子探针和造影剂等参与疾病治疗和临床诊断。亚五FeNPs是指粒径小于5 nm的FeNPs,特点是超小尺寸、分布窄、生物相容性好并具有超顺磁性,有广阔的应用潜力:可作为T1造影剂,提供高灵敏度肿瘤成像;在外部磁场的作用下,可靶向肿瘤组织,进行磁热治疗;也可用于细胞磁标记示踪与多模态分子影像探针构建等,且由于超小粒径的尺寸效应,可快速被肾脏和肝脏清除。为推进亚五氧化铁纳米颗粒的实际应用,我们以模式动物斑马鱼的胚胎作为研究对象,探讨了其对胚胎的发育毒性作用,对其进行生物安全评估。斑马鱼是进行脊椎动物研究的模式生物,其透明的胚胎和体外受精的受精方式对发育生物学的研究性实验提供了极大的便利,近年来荧光蛋白特异性标记的转基因斑马鱼品系的构建,进一步增强了斑马鱼作为模式生物的优势。我们以不同尺寸的6 nm和12 nm FeNPs作为参照,以斑马鱼胚胎作为研究对象,探讨了超小尺寸的3 nm FeNPs的发育毒性,主要结论如下:1、3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎活力的影响:（1）斑马鱼胚胎死亡率随着FeNPs浓度增大,作用时间增长而增加;（2）斑马鱼胚胎的死亡率与FeNPs粒径成反比,即;（3）斑马鱼胚胎总畸形率随FeNPs浓度升高而增加,随粒径减小而增加,畸形具体表现为小头畸形、小眼畸形、心包水肿、卵黄囊肿、脊椎弯曲、尾部发育异常和发育迟缓甚至发育失败;（4）3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎具有氧化损伤作用;（5）3 nm FeNPs可介导胚胎细胞的凋亡,其主要的作用部位为消化系统。2、3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎器官发育的影响:（1）FeNPs对心脏发育的影响:以心脏转基因荧光斑马鱼Tg（cmlc2:EGFP）作为对象,3 nm FeNPs对心脏的毒性作用表现在使心脏发育迟缓,心脏体积较小,心室肥大;（2）FeNPs对血管发育的影响:以血管转基因荧光斑马鱼Tg（flk1:EGFP）作为对象,3 nm FeNPs对血管的毒性作用表现在血管发育不全,脑部血管收缩,尾部静脉血管分布异常,躯干节间血管闭塞,主动脉总体收缩等血液循环系统发育异常;（3）FeNPs对肝脏发育的影响:以肝脏转基因荧光斑马鱼Tg（lfabp:m Cherry）作为对象,FeNPs暴露后的胚胎肝脏体积明显减小;（4）FeNPs对肾脏发育的影响:以肾脏转基因荧光斑马鱼Tg（wt1b:EGFP）作为对象,FeNPs暴露2 dpf后发现FeNPs对肾脏的发育毒性具体表现为前肾肾小球缩小,肾小管颈部位明显缺失,肾小管近曲小管曲状折叠消失等肾脏发育畸形;（5）FeNPs对软骨发育的影响:3 nm FeNPs暴露后的幼鱼的头部骨骼变小,舌骨小角角度呈现弧形,梅克尔骨变短,角腮骨形态紊乱,咽尺等发育不明显,胸鳍发育缺陷。3、3 nm FeNPs对斑马鱼神经肌肉和运动系统发育的影响:（1）FeNPs对神经发育的影响:以Tg（eef1a1l1:EGFP）转基因荧光鱼作为对象,发现中枢神经系统和周围神经系统明显萎缩,神经系统发育出现异常;（2）FeNPs对骨骼肌发育的影响:使用偏振光检测胚胎骨骼肌发育,发现3 nm处理组肌肉组织呈现双折射平均强度仅为对照组的42%,骨骼肌发育不全,肌纤维束紊乱;（3）斑马鱼胚胎的运动轨迹分析:在明暗交替环境下的自由游泳实验中,发现3 nm FeNPs处理的斑马鱼幼鱼的运动能力下降,游泳距离相对于对照组下降了65%,移动速度减少了82%。4、为研究3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎发育不同阶段发育毒性的分子机制,我们收集了终浓度40 mg/L 3 nm FeNPs处理的48 hpf、72 hpf、96 hpf和120 hpf的胚胎,对其进行转录组测序并分析,得到如下结果:（1）48 hpf组的胚胎眼部和感知系统的发育信号受到纳米颗粒的显着作用,并且对心脏和血管发育也有影响;（2）72 hpf组的表达差异基因集中在眼部发育和对光照的感知方面,包括神经突触、光刺激的感知、突触信号、光转导、视黄醇代谢等;（3）96 hpf时,处理组斑马鱼胚胎表达差异基因集中于感官知觉、光刺激的感知、凋亡、溶酶体、吞噬体、铁凋亡等;（4）120 hpf处理组的表达差异基因集中于铁稳态、三价铁结合、铁凋亡、细胞坏死、谷胱甘肽代谢等。5、转录组数据的加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）对上述3 nm FeNPs处理的48 hpf、72 hpf、96 hpf和120 hpf的胚胎的转录组数据进一步挖掘,筛选出关键基因:plcd1a和prkcdb。plcd1a与神经信号传导、神经传递激素、神经肌肉信号相关,影响GTPase蛋白偶联Wnt/Ca2+信号转导,从而作用于神经肌肉系统的信号传递,这与我们使用转基因荧光鱼所发现的表型一致,即3 nm FeNPs影响了胚胎的神经肌肉系统发育和运动能力;prkcdb表达量的升高会造成下游erk升高,导致ROS升高,细胞内过氧化产生,与前文结论一致,即3 nm FeNPs对胚胎活性的影响表现在对细胞的氧化胁迫和炎性反应。综上所述,本文系统研究了3 nm FeNPs的发育毒性及其作用机理,发现3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎的胚胎活性、心脏发育、血管发育、肝脏发育、肾脏发育、软骨发育、神经肌肉系统和运动能力都有影响,并在转录组水平上探讨了3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎的器官发育的分子机制。本研究对亚五氧化铁纳米颗粒的脊椎动物体内毒理学研究奠定了基础,以期推动临床研究的进行。
王淼[5]（2021）在《SNX10在小鼠创伤性骨关节炎运动干预中的作用研究》文中研究说明研究背景创伤性骨关节炎（Post-traumatic osteoarthritis,PTOA）主要表现为关节软骨破坏,滑膜炎症,骨赘形成、软骨下骨病理性退变等骨重建变化。适宜强度的运动对关节软骨具有保护作用,但作用机制尚不明确。分选连接蛋白10（Sorting nexin 10,SNX10）基因突变能够调控骨代谢和炎症进程,与PTOA的基础病理存在潜在联系。研究目的本团队前期预实验发现,大强度运动过程中SNX10在软骨中基因表达上调,推测其参与调控软骨细胞的功能。本研究利用基因敲除技术,在动物实验与细胞分子水平系统地研究了SNX10在PTOA小鼠运动干预中的作用,揭示SNX10在软骨细胞功能调控中的重要性,为PTOA的运动干预提供了理论依据。研究方法第一部分运动对创伤性骨关节炎小鼠膝关节软骨SNX10的影响1.45只20周龄野生型雄性小鼠随机分为5组:模型对照组（Nor,n=9）、模型组（Mod,n=9）、对照组（Con,n=9）、模型静养组（Res,n=9）、模型康复组（Rh,n=9）。2.Nor和Con组小鼠不进行运动干预。Mod、Res、Rh组小鼠进行为期5周大强度跑台运动,跑台坡度5°,最大速度20 m/min,5天/周,造成PTOA动物模型。Rh组小鼠造模结束后,休息1周后进行为期4周的小强度跑台运动干预,坡度0°,匀速8m/min,5天/周。Res组小鼠造模后开始5周静养。3.每周记录小鼠体重。Nor、Mod组小鼠在实验第5周结束时处死,Con、Res、Rh组小鼠在实验第10周结束时处死,并取小鼠双侧后肢膝关节组织和眼球血清。Micro-CT检测相关骨质参数;石蜡切片进行HE染色检测Mankin’s评分,番红固绿染色检测OARSI评分;RT-qPCR检测软骨组织中SNX10、MMP9、β-catenin、COL-Ⅱ、ADAMTS-5、TNF-α、IL-1βm RNA表达水平;ELISA检测血清中IL-6、TNF-α、GAG的含量;Western-blot检测SNX10、MMP9蛋白表达变化。第二部分SNX10缺失在创伤性骨关节炎小鼠膝关节软骨损伤中的作用1.遗传背景为C57BL/6雄性小鼠。18只Snx10-/-小鼠随机分为2组:模型对照组（KO-Nor,n=9）、模型组（KO-Mod,n=9）;18只同窝Snx10+/+小鼠随机分为2组:模型对照组（WT-Nor,n=9）、模型组（WT-Mod,n=9）。2.KO-Nor和WT-Nor组小鼠不进行运动干预;KO-Mod和WT-Mod PTOA造模方法同第一部分。3.每周记录小鼠体重。4组小鼠实验第5周结束时处死。取材、Micro-CT、Mankin’s评分、OARSI评分、RT-qPCR、ELISA检测指标同第一部分,RT-qPCR检测SNX10 m RNA;采用Western-blot验证Snx10-/-小鼠建立成功,检测MMP9、β-catenin蛋白表达变化。第三部分机械牵张力刺激下SNX10缺失对软骨细胞修复的作用1.野生型原代软骨细胞,按牵张时长分为4组:正常对照组（CON）,牵张1h组（1H）,牵张2h组（2H）,牵张4h组（4H）。采用0.5Hz、10%强度进行机械牵张力刺激。2.RT-qPCR检测软骨细胞中SNX10、MMP9、β-catenin、COL-Ⅱ、TNF-α、IL-1βm RNA表达水平;（Annexin V-FITC/PI）检测试剂盒检测各组软骨细胞凋亡情况。确定适宜的机械牵张方案。3.检测梯度浓度为2ng/ml、4ng/ml、6ng/ml、8ng/ml、10ng/ml的IL-1β刺激剂对野生型原代软骨细胞活性的影响。4.提取Snx10-/-和同窝Snx10+/+原代软骨细胞。单个基因型分为4组:对照组（CON）,牵张1h组（1H）,IL-1β组（IL-1β）,IL-1β+牵张组（S）,2个基因型共计8组。CON组不进行干预;IL-1β、S组使用IL-1β刺激剂干预;1H组使用0.5Hz、10%强度、1H的机械牵张力刺激,S组在IL-1β刺激剂后使用0.5Hz、10%强度、1H的机械牵张力刺激。5.RT-qPCR检测MMP9、COL-Ⅱ、β-catenin m RNA表达水平;Western-blot和免疫荧光法检测MMP9、COL-Ⅱ、β-catenin蛋白表达变化。研究结果第一部分运动对创伤性骨关节炎小鼠膝关节软骨SNX10的影响1.Mod组和Res组小鼠体重显着下降（P<0.05）。2.Mod组小鼠骨矿物质密度、骨小梁厚度升高（P<0.05）、连接密度下降（P<0.05）;Rh组小鼠骨矿物质密度升高（P<0.05）。3.Mod组和Res组软骨损伤评分（Mankin’s）及钙化评分（OARSI）升高（P<0.05）,Rh组较Res组评分下降（P<0.05）。4.造模后Mod组COL-Ⅱm RNA显着下调（P<0.05）,SNX10、MMP9、β-catenin、ADAMTS-5、TNF-α、IL-1βm RNA显着上调（P<0.05）;与Con组相比Res组ADAMTS-5、IL-1βm RNA显着上调（P<0.05）;与Res组相比Rh组COL-Ⅱm RNA显着上调（P<0.05）,ADAMTS-5、TNF-α、IL-1β、β-catenin、MMP9、SNX10 m RNA显着下调（P<0.05）。5.与Nor组和Con组对比,Mod组和Res组血清中的IL-6、TNF-α含量均显着上调（P<0.001）,GAG含量显着下调（P<0.001）;与Res组相比,Rh组IL-6、TNF-α含量均显着下调（P<0.001）,GAG含量显着上调（P<0.001）。6.与Con组对比,Res组SNX10蛋白表达显着上调（P<0.05）;与Res组相比,Rh组SNX10和MMP9的蛋白表达显着下调（P<0.05）。第二部分SNX10缺失在创伤性骨关节炎小鼠膝关节软骨损伤中的作用1.与KO-Nor组相比,KO-Mod组小鼠体重在3-5周显着下降（P<0.05）。KO-Mod组小鼠在第5周体重大于WT-Mod小鼠（P<0.05）。2.与其他对应的组别相比,KO-Mod组小鼠骨矿物质密度、连接密度、骨小梁厚度显着升高（P<0.05）。3.KO小鼠与WT小鼠比较,造模前后的软骨损伤评分降低（P<0.05）。4.与WT-Mod组相比,KO-Mod组COL-Ⅱm RNA显着上调（P<0.05）,ADAMTS-5、TNF-α、IL-1β、MMP9、β-catenin m RNA显着下调（P<0.05）。5.与WT-Mod组相比,KO-Mod组血清中的IL-6、TNF-α含量均显着下降（P<0.001）,GAG含量显着上升（P<0.001）。6.Western-blot结果显示,Snx10-/-全基因敲除型小鼠建立成功;基因敲除可以显着下调造模前后MMP9、β-catenin蛋白表达（P<0.05）。第三部分机械牵张力刺激下SNX10缺失对软骨细胞修复的作用1.1H的机械牵张可以显着下调软骨细胞β-catenin、TNF-α、IL-1βm RNA水平（P<0.01）,显着上调COL-Ⅱm RNA（P<0.05）,2H、4H组显着上调SNX10、TNF-α、β-catenin m RNA（P<0.01）、COL-Ⅱm RNA显着下调（P<0.01）。2.1H组细胞凋亡情况较轻,4H组细胞凋亡情况显着。3.10ng/ml浓度的IL-1β能够明显降低软骨细胞活性。4.IL-1β刺激剂可显着上调MMP9、β-catenin m RNA（P<0.05）,显着下调COL-Ⅱm RNA（P<0.05）;结合1H机械牵张,KO组比WT组下调MMP9、β-catenin m RNA的效果更显着（P<0.01）,COL-Ⅱm RNA显着上调（P<0.05）。5.IL-1β刺激剂可显着下调COL-Ⅱ的蛋白表达（P<0.05）,显着上调MMP9、β-catenin的蛋白表达（P<0.05）;机械牵张对IL-1β刺激剂诱导两种基因型的软骨细胞COL-Ⅱ、MMP9、β-catenin的蛋白表达具有调节作用;基因敲除结合机械牵张显着下调了MMP9的蛋白表达显着下降（P<0.05）。研究结论1.小强度跑台对小鼠创伤性骨关节炎模型软骨组织具有调控作用。2.SNX10基因缺失缓解了小鼠PTOA进程中软骨组织的损伤程度。3.SNX10基因缺失与适宜的机械牵张力刺激调控软骨细胞炎症因子、合成与降解因子的表达,从而保护PTOA中的软骨细胞。4.适宜强度的运动和机械牵张力刺激通过SNX10介导MMP9、β-catenin促进软骨组织修复。
刘维妙[6]（2021）在《芸薹属基本种扩展蛋白基因家族的进化分析及花粉发育相关扩展蛋白基因的功能分化研究》文中认为花粉发育和授粉受精过程是开花植物完成有性生殖的重要环节。花粉发育异常会影响其功能的正常完成,进而影响后代的繁衍。授粉受精过程的顺利进行离不开花粉管正常的萌发和伸长。花粉管的萌发通常起始于成熟花粉粒的内壁。在花粉管快速伸长的过程中尤其需要细胞壁的快速扩展,众多细胞壁合成和重塑蛋白都参与其中。植物扩展蛋白（expansins,EXP）是一类重要的细胞壁重塑蛋白,可以与细胞壁的多糖组分结合,通过破坏细胞壁组分之间的非共价键引起植物细胞壁的松弛,促进植物细胞的生长。扩展蛋白基因家族被细分为四个亚家族,分别是EXPA（expansin A subfamily,扩展蛋白A亚家族）、EXPB（expansin B subfamily,扩展蛋白B亚家族）、EXLA（expansin like A subfamily,扩展蛋白类A亚家族）和EXLB（expansin like B subfamily,扩展蛋白类B亚家族）。虽然近年来扩展蛋白基因的功能被广泛研究,但是有关扩展蛋白基因在植物生殖发育阶段的功能以及有关EXPA和EXPB亚家族基因协调作用都还鲜有报道。本文以白菜‘矮脚黄’（Brassica campestris ssp.chinensis,syn.B.rapa ssp.chinensis cv.Aijiaohuang）核雄性不育两用系ajhGMS‘Bcajh97-01A/B’和黑芥（B.nigra cv.Z1411-02）以及甘蓝（B.oleracea cv.Jingfeng 1）为材料,对芸薹属三个二倍体基本种的扩展蛋白基因家族进行鉴定、进化和表达分析,明确三个基本种扩展蛋白基因家族的进化特征,为探究扩展蛋白基因在花粉和花粉管发育过程中的功能提供相关基础;由基因家族分析筛选到两个在白菜花粉发育后期和花粉管中高表达的基因BrEXPB4和BrEXPB9,通过人工microRNA技术研究BrEXPB4和BrEXPB9在白菜花粉和花粉管发育中的功能;采用CRISPR/Cas9技术和过表达技术对两者在模式植物拟南芥中的同源基因AtEXPB5进行生物学功能的分析,并对与其在花粉和花粉管发育阶段具有冗余功能的AtEXPA4进行验证;通过酵母单杂交和双荧光素酶实验对AtEXPB5和BrEXPB4/9可能参与的转录调控路径进行研究。取得的主要结果与结论如下:（1）通过三步分析法,鉴定了芸薹属三个基本种（白菜、甘蓝和黑芥）的扩展蛋白基因家族,并经与模式植物拟南芥的系统发育、基因结构和理化特性的比较分析对它们的扩张模式和进化细节进行了研究,发现经过独立的进化,扩展蛋白基因家族在这三个基本种中的相似性较多,而分歧较少。通过比较启动子和编码序列的差异,发现在拟南芥和三个基本种的直系同源物之间存在显着正相关性。随后的表达分析表明这三个物种的扩展蛋白基因家族中存在广泛的功能差异,特别是在生殖发育过程中筛选到两个在白菜花粉和花粉管发育阶段强烈表达的基因BrEXPB4和BrEXPB9。（2）通过烟草和洋葱瞬时表达体系进行亚细胞定位的结果表明,BrEXPB4和BrEXPB9都定位在细胞壁上,这与它们都具有信号肽结构的预测结果一致。通过荧光定量PCR和GUS基因报告系统进行的时空表达分析表明,BrEXPB4和BrEXPB9的表达模式也很相似,都是从单核花粉后期开始表达,并随着花粉的发育,表达量逐步升高,并且可以一直持续到花粉管中。（3）采用人工microRNA技术分别和同时抑制BrEXPB4和BrEXPB9的表达,进而对它们的生物学功能进行鉴定。当它们被单独抑制时,对植株的生长发育并没有造成明显的影响。然而当它们的表达被同时抑制时,却造成约50%的花粉败育,并不能正常萌发。对败育花粉的细致观察显示,花粉的败育起始于单核花粉晚期,进一步使小孢子细胞质和花粉内壁降解,最终造成花粉败育和萌发异常。（4）通过亚细胞定位和时空表达分析,发现AtEXPB5定位在细胞壁上,并且其编码基因在成熟花粉粒和花粉管中强烈表达。然而,无论是敲除AtEXPB5还是过表达AtEXPB5都未对拟南芥的生长发育造成显着影响。结合前人相关电子表达谱的研究,发现仅有AtEXPA4在生殖发育阶段与AtEXPB5具有相似的表达模式。构建了AtEXPA4的敲除和过表达材料,并通过杂交获得AtEXPA4和AtEXPB5的双突变体,观察发现在双突变体中,花粉管伸长的速度显着减缓,并且无论是AtEXPB5还是AtEXPA4都可以恢复双突变体花粉管伸长减缓的表型,说明AtEXPA4和AtEXPB5冗余地参与了花粉管的发育。（5）通过亚细胞定位和时空表达分析,发现AtEXPA4定位在细胞壁上,其编码基因不仅在生殖发育阶段表达,也在拟南芥的根中优势表达。主根长度和根分生区的测量结果表明,AtEXPA4对于主根的生长具有促进作用。（6）通过酵母单杂交和双荧光素酶实验表明,AtEXPB5的表达可由AtTDF1和AtAMS共同激活,而这一调控途径在白菜中并不保守。这说明AtEXPB5和BrEXPB4/9的生物学功能产生分化,并且参与不同的转录调控路径。BrEXPB4/9及其同源基因AtEXPB5在表达模式、功能和调控网络上显示出巨大差异说明在进化过程中,同源基因物也会产生功能和调控的变化。
翟康欣[7]（2021）在《连翘归尾煎抗乳腺癌药效作用及机制研究》文中研究指明目的探讨连翘归尾煎抗乳腺癌的药效作用及机制。通过建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型探究连翘归尾煎体内抗乳腺癌的药效作用;基于网络药理学技术预测连翘归尾煎抗乳腺癌的作用机制;通过体外及体内实验探究连翘归尾煎抗乳腺癌的作用机制;分子对接技术预测连翘归尾煎抗乳腺癌的有效活性成分,并通过实验验证活性成分对细胞增殖的抑制作用。方法1.将小鼠4T1乳腺癌细胞接种于BALB/c小鼠建立乳腺癌荷瘤小鼠模型,分为模型组（生理盐水,灌胃给药）,CTX组（环磷酰胺,20 mg/kg/d,腹腔注射给药）,连翘归尾煎低剂量组（8.6 g/kg/d,灌胃给药）,连翘归尾煎中剂量组（17.2 g/kg/d,灌胃给药）,连翘归尾煎高剂量组（34.4 g/kg/d,灌胃给药）,每组10只,连续给药14 d;观察小鼠体重、肿瘤重量及体积的变化,计算肿瘤抑制率。2.利用中药系统药理学数据库（TCMSP）筛选连翘归尾煎的有效活性成分及靶基因,Gene Card数据库筛选乳腺癌相关作用靶基因,运用STRING平台以及Cytoscape建立蛋白互作网络和药物-成分-靶基因-疾病相互关系网络,基于David数据库进行GO分析和KEGG富集分析,探寻连翘归尾煎抗乳腺癌的相关作用机制。3.CCK-8法研究不同浓度的连翘归尾煎对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响;Hoechst33258染色法检测不同浓度的连翘归尾煎对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR（q RT-PCR）法检测不同浓度的连翘归尾煎对细胞内PI3K、Akt、Bax、Bcl-2m RNA表达的影响;蛋白免疫印迹实验（Western blot）检测不同浓度的连翘归尾煎对细胞内PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2以及Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的影响。苏木精-伊红（HE）染色法观察乳腺癌肿瘤组织形态学变化;TUNEL法检测乳腺癌肿瘤组织中细胞凋亡率;Western blot测定乳腺癌肿瘤组织中PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平变化。4.利用分子对接将连翘归尾煎抗乳腺癌的活性成分与关键靶基因相结合,根据分子对接打分结果筛选连翘归尾煎中主要有效活性成分,采用CCK-8法检测不同活性成分对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用。结果1.与模型组相比,CTX组与连翘归尾煎各剂量组乳腺癌小鼠的肿瘤体积和质量明显减小,与模型组相比差异具有统计学意义,CTX组肿瘤抑制率为71.15%P<0.001),连翘归尾煎低剂量组为21.48%（P<0.05）,中剂量组为26.67%（P<0.05）,高剂量组为28.52%（P<0.05）。2.通过网络药理学技术共筛选出134个连翘归尾煎的有效活性成分及其靶基因,与乳腺癌相关作用靶基因映射得到66个关键靶基因,GO功能富集涉及富集481个生物学过程及功能,KEGG通路富集显示92条信号通路,包括癌症通路、肿瘤蛋白多糖、PI3K-Akt信号通路等,其中共25个靶基因参与了PI3K/Akt通路,提示连翘归尾煎抗乳腺癌作用可能主要与PI3K/Akt信号通路相关。3.CCK-8结果显示不同浓度的连翘归尾煎（0.1-1.0 mg/m L）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用,抑制率最高达到60.38%,IC50为0.7872 mg/m L;Hoechst染色结果显示不同浓度的连翘归尾煎（0.25、0.5、1.0 mg/m L）可诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,呈剂量依赖性;q RT-PCR结果显示不同浓度的连翘归尾煎（0.25、0.5、1.0 mg/m L）呈剂量依赖性的降低PI3K、Akt、Bcl-2m RNA表达量（P<0.05,P<0.001,P<0.001）,增加Baxm RNA表达量（P<0.05）;Western blot结果显示不同浓度的连翘归尾煎（0.25、0.5、1.0 mg/m L）能够抑制PI3K、Akt蛋白的活化（P<0.05,P<0.01）,下调p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平（P<0.01,P<0.01）,以及上调凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值（P<0.05）,并呈剂量依赖性;与模型组相比,HE染色结果显示CTX与连翘归尾煎可加重肿瘤坏死程度;TUNEL染色结果显示,CTX与连翘归尾煎可诱导小鼠乳腺癌肿瘤组织细胞凋亡,凋亡细胞数量明显增多（P<0.01,P<0.05）;Western blot实验结果显示,CTX可降低PI3K与Akt蛋白表达量（P<0.05,P<0.01）,连翘归尾煎处理后则无明显变化,CTX与连翘归尾煎可降低p-PI3K、p-Akt蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达量,同时升高Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量,Bax/Bcl-2的比值显着升高（P均<0.05）。4.基于分子对接技术将连翘归尾煎抗乳腺癌的活性成分与关键靶基因Akt1相结合,得到对接打分结果。CCK-8实验结果显示牛蒡子苷及白桦脂酸均对人乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用,牛蒡子苷抑制率为68.40%,IC50为25.33μmol/L;白桦脂酸抑制率为60.01%,IC50为66.9μmol/L。结论研究证实了连翘归尾煎在体外及体内均能显着抑制乳腺癌的发生与发展,其作用机制可能是通过PI3K/Akt信号通路调控下游相关凋亡蛋白。牛蒡子苷及白桦脂酸可能为连翘归尾煎抗乳腺癌作用的有效活性成分,该结果为后续研究连翘归尾煎的有效指标成分提供了实验依据。
李华[8]（2021）在《川芎嗪对结肠癌细胞的抑瘤效应及改变线粒体活性氧代谢介导凋亡通路的机制研究》文中研究表明背景结肠癌是消化道中常见的恶性肿瘤之一,在我国,其发病率及死亡率呈逐年上升趋势,多数患者就诊时已属于中晚期。针对晚期及复发患者,化疗是主要的治疗手段,但化疗药物存在较强的毒副反应以及药物耐药的出现严重影响结肠癌患者的治疗效果及预后。因此,亟待寻找新型的抗肿瘤药物为结肠癌患者提供新的治疗手段。传统中药是抗癌药物的宝库,川芎嗪是从川芎中提取的一种生物碱单体,川芎嗪作为川芎的主要活性成分,多项研究证实川芎嗪可对肝癌、胃癌、前列腺癌、宫颈癌和乳腺癌等多种肿瘤具有良好的抗肿瘤作用。然而,关于川芎嗪是否能抑制结肠癌细胞生长及其作用机制的研究较少。目的探讨川芎嗪对结肠癌的抗肿瘤作用,并探讨其抗结肠癌的作用机制。川芎嗪对不同结肠癌细胞的杀伤作用分析;明确川芎嗪抗结肠癌细胞增殖以及促进结肠癌细胞凋亡的作用;进一步探讨川穹嗪改变线粒体活性氧代谢介导结肠癌细胞凋亡通路的调控机制;在结肠癌荷瘤小鼠中验证川芎嗪的抗肿瘤效果。方法采用结晶紫染色法观察川芎嗪对结肠癌细胞的杀伤作用;采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞增殖率,观察川芎嗪作用的浓度依赖性和时间依赖性并计算IC50;通过流式细胞术检测细胞凋亡率及对细胞周期的影响;运用Annexin-V/PI双染的方法检测细胞凋亡的类型和比例;细胞内活性氧含量用DCFH-DA探针来检测;用活性氧抑制剂（NAC）和Caspase泛抑制剂（Z-VAD-FMK）联合川芎嗪作用于结肠癌细胞,观察清除活性氧及阻断凋亡相关靶蛋白后对结肠癌细胞凋亡的影响;建立结肠癌荷瘤动物模型,通过检测肿瘤组织中丙二醛和分析移植肿瘤内活性氧含量,采用Caspase 3和Caspase 9活性检测试剂盒检测移植肿瘤内Caspase 3和Caspase 9蛋白含量。结果1.川芎嗪对6种结肠癌细胞均有杀伤效果,并且随着川芎嗪药物浓度升高,结肠癌细胞存活量逐渐减少,杀伤效果在HCT116和SW480两株细胞中最为敏感。HCT116和SW480两种细胞系的IC50最低;2.随着川芎嗪浓度的增加和作用时间的延长,显微镜下细胞数减少。与对照组相比,3.川芎嗪浓度达到600μg/ml时,HCT116和SW480细胞数目显着减少,细胞收缩和圆,分裂和漂浮。随着川芎嗪浓度的增加和作用时间的延长,HCT116和SW480细胞的增殖活性逐渐降低;4.随着川芎嗪浓度的增加,G1期的细胞比例逐渐增多,S期的细胞比例逐渐减少。与对照组相比,在600μg/ml以上浓度的川芎嗪作用下,细胞周期中S期的比例与对照组相比差异有统计学意义;5.随着川芎嗪浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加,呈浓度依赖性。600μg/ml处理组细胞凋亡率具有统计学意义。SW480细胞中以早期凋亡增加（annexin+/pi-,右下象限）增加为着,HCT116细胞呈现晚期凋亡（annexin+/pi+,右上象限）增加为着;6.与DMSO对照组相比,川芎嗪组的HCT116和SW480细胞数目显着减少,细胞收缩变圆、破碎并漂浮。川芎嗪+NAC和川芎嗪+Z-VAD-FMK组与川芎嗪组相比,细胞数目明显增多。川芎嗪组相比DMSO对照组细胞凋亡率明显升高,川芎嗪+NAC和川芎嗪+Z-VAD-FMK组与川芎嗪组相比,两组凋亡率显着降低。NAC组细胞存活率高于Z-VAD-FMK 组;7.川芎嗪组活性氧含量明显增加,与DMSO组相比有显着性差异。川芎嗪+NAC组与川芎嗪处理组相比,活性氧含量显着下降。川芎嗪+Z-VAD-FMK组活性氧含量与川芎嗪处理组在SW480结肠癌细胞中无明显变化。在HCT116结肠癌细胞中川芎嗪+Z-VAD-FMK组与川芎嗪处理组相比活性氧含量有所下降;8.川芎嗪组与对照组相比,Caspase 3,9和PARP均发生明显的剪切活化,蛋白表达明显增高。川芎嗪+Z-VAD-FMK组和川芎嗪+NAC组,与川芎嗪组相比,Caspase 3,9和PARP这种活化可以被Z-VAD-FMK和NAC显着抑制;川芎嗪+NAC组Caspase 3,9和PARP表达与川芎嗪+Z-VAD-FMK组相比,表达抑制更为显着,蛋白表达降低;9.动物实验中,高浓度川芎嗪组移植瘤生长明显抑制,且呈浓度依赖性,移植瘤的重量分布为:1.62±0.48 g（浓度 0 mg/kg）、0.92±0.21 g（浓度 50 mg/kg）和 0.58±0.19 g（浓度100 mg/kg）,差异有显着性和浓度依赖性;10.川芎嗪高浓度组（100 mg/kg）的动物模型移植肿瘤中的丙二醛和Caspase3,9蛋白含量显着高于低浓度组（50 mg/kg）和对照组（0 mg/kg）,具有显着统计学差异,且有浓度依赖性。结论1.川芎嗪对结肠癌细胞有明显的抑制增殖、促进凋亡作用,并呈现时间与浓度依赖性;2.结肠癌细胞在川芎嗪作用下能够将凋亡细胞增殖阻止在G1期,进而抑制细胞周期S期的合成,从而抑制细胞增殖;3.川芎嗪诱导结肠癌细胞凋亡与产生大量活性氧从而激活Caspase依赖性细胞凋亡通路密切相关,活性氧抑制剂可以更有效抑制川芎嗪诱导的细胞凋亡;4.川芎嗪诱导结肠癌细胞内活性氧含量增高在Caspase依赖性凋亡通路的上游发挥诱导细胞凋亡的调控作用;5.川芎嗪在结肠癌裸鼠移植瘤中能显着抑制肿瘤增殖,增加裸鼠体内的活性氧和Caspase3,9的含量并诱导肿瘤细胞凋亡。
王继雪[9]（2021）在《化裁血府逐瘀汤治疗下肢动脉硬化闭塞症的作用机制》文中提出目的:通过数据挖掘分析导师治疗下肢动脉硬化闭塞症的中药处方特点,提炼出治疗本病的基础核心主方化裁血府逐瘀汤;观察化裁血府逐瘀汤在临床治疗FontaineⅠ-Ⅲ期下肢动脉硬化闭塞症的疗效及安全性;并通过细胞实验初步探讨可能的作用机制,为临床的推广提供理论基础。方法:第一部分:纳入本课题组2010年9月～2020年9月,黑龙江中医药大学附属第一医院周围血管病科住院部及门诊收治的下肢动脉硬化闭塞症患者,共筛选出388例医案作为研究对象,建立数据库。利用中医传承计算平台（V3.0）对患者的基本信息、证型、处方药物等进行频数统计、关联规则分析及聚类分析等,对数据挖掘结果进行深入分析。第二部分:纳入2020年9月～2020年12月黑龙江中医药大学附属第一医院周围血管病科收治的下肢动脉硬化闭塞症患者共45例。治疗组23例,治疗方案为化裁血府逐瘀汤联合贝前列素钠片;对照组22例,口服贝前列素钠片。化裁血府逐瘀汤药物组成为桃仁20g、红花20g、赤芍15g、川芎15g、牛膝15g、当归20g、熟地黄20g、党参20g、黄芪20g、炙甘草15g,由黑龙江中医药大学附属第一医院统一煎制,早晚各口服200 mL,4周为1个疗程。比较治疗组与对照组治疗前后中医症状评分及临床疗效、踝肱指数、下肢红外热像、TG、TC、HDL-C、LDL-C、hs-CRP、FIB,采用SPSS 23.0软件进行统计学描述与分析。以P<0.05,差异具有统计学意义。第三部分:体外培养大鼠血管平滑肌细胞,使用ox-LDL诱导血管平滑肌细胞损伤模型,空白组、模型组、化裁血府逐瘀汤含药血清低、中、高剂量组及阳性药物含药血清（阿托伐他汀）组。观察细胞形态,BrdU染色,划痕实验及Transwell迁移实验分别检测血管平滑肌细胞增殖与迁移的能力,蛋白免疫印迹法检测α-SMA、CRBP1、PCNA、MMP-9、TGF-β1、TβRI、p-Smad3及t-Smad3蛋白表达水平,免疫荧光法检测α-SMA、CRBP1表达水平,激光共聚焦显微镜观察p-Smad3定位及表达水平,RT-PCR检测血管平滑肌细胞内MMP-9 mRNA、PCNA mRNA的表达水平。结果:第一部分:1.患者的各年龄段发病人数及性别频次统计:40～49岁下肢动脉硬化闭塞症的发病人数29人,50～59岁63人,60～69岁133人,70～79岁123人,≥80岁40人。388例下肢动脉硬化闭塞症患者中男性244人,女性144人。2.中医证型频次统计:按照频次升降顺序排列,血脉瘀阻证139例、寒凝血瘀证67例、气滞血瘀证47例、血虚血瘀证29例、阴虚瘀热证27例、寒湿阻络证22例、痰瘀阻络证16例、气血两虚证13例、湿热瘀滞证13例、阳虚血瘀证11例、阴虚血瘀证4例。3.用药频次统计:总计使用184种药物,所有药物的使用频次之和为6310次,药物频次≥30次的药物共53味;其中,频次≥100的药物为17种,使按照升降次序进行排名分别是当归、牛膝、熟地黄、赤芍、桃仁、黄芪、地龙、红花、炙甘草、川芎、生地黄、柴胡、炒白术、党参、茯苓、桂枝、积壳。4.药物四气、五味及归经统计:四气频次统计分析:温性药物使用2277次、寒性1678次、平性1607次、热性151次;药物五味频次统计:甘味药物3072次、苦味2721次、辛味1830次、酸味800次、咸味494次;药物归经频次统计:肝经3748次、脾经2435次、心经2323次、肾经1812次、肺经1709次。5.用药模式统计:将支持度个数设置在130,置信度0.9,结果显示出常用的中药组合,共计198条。常用2味药物组合,如“当归,牛膝”等;常用3味药组:如“当归,牛膝,熟地黄”等;常用4味药组合:如“当归,牛膝,桃仁,红花”等;常用5味药组合:如“当归,牛膝,熟地黄,桃仁,红花”等。6.规则分析统计:将支持度个数设置在130,置信度为0.9,进行药物规则分析。当“->”左侧药物时,右侧药物在388例处方中所出现的概率为99%以上,通过分析共得到134条规则。7.聚类分析结果:将聚类个数设置为5,提取核心中药组合共5条。核心组合1的频次统计104次;核心组合2的频次统计89次;核心组合3的频次统计77次;核心组合4的频次统计61次;核心组合5的频次统计57次。第二部分:1.所纳入的下肢动脉硬化闭塞症患者两组治疗前基线比较,差异无统计学意义,具有可比性（P>0.05）。2.主要结局指标:组内比较下肢动脉硬化闭塞症患者中医症状评分,治疗后优于治疗前（P<0.05）;组间结果表明,治疗组改善程度优于对照组（P<0.05）。3.次要结局指标:组内比较踝肱指数及下肢红外热像温度,治疗后优于治疗前（P<0.05）;组间比较的结果表明,治疗组优于对照组（P<0.05）。组内比较,治疗后实验室指标TG、TC、LDL-C、hs-CRP、FIB与疗前相比各项指标下降,HDL-C升高,治疗后明显优于治疗前（P<0.05）;组间比较,治疗组各项指标改善情况均优于对照组（P<0.05）。4.两组临床疗效评定:治疗组显效22例、有效1例,对照组临床治愈1例、显效6例、有效14例、病情恶化1例,两组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。第三部分:1.细胞形态学观察:空白组血管平滑肌细胞形态正常,呈典型“峰-谷”状结构。通过ox-LDL处理后,细胞数量减少,形态不规则,伪足回缩明显。随着化裁血府逐瘀汤含药血清浓度增加,血管平滑肌细胞出现峰谷状结构。2.细胞增殖实验检测结果显示:与空白组比较,模型组血管平滑肌细胞增殖效率显着增强;与模型组比较,化裁血府逐瘀汤含药血清呈浓度依赖性抑制增殖效率（P<0.05）。3.平滑肌细胞迁移实验结果表明:与空白组相比,模型组血管平滑肌细胞迁移能力逐渐增强;与模型组比较,随着化裁血府逐瘀汤含药血清浓度的增加,血管平滑肌细胞的迁移能力逐渐减弱（P<0.05）。4.蛋白免疫印迹法检测各组细胞中α-SMA、CRBP1、PCNA、MMP-9及TGF-β1/Smad3通路相关蛋白的表达水平。与空白组比较,模型组α-SMA表达水平显着降低,CRBP1、PCNA、MMP-9、TGF-β1、TβRI、p-Smad3的蛋白表达水平显着提高（P<0.05）;与模型组比较,化裁血府逐瘀汤含药血清能浓度依赖性提高α-SMA表达水平,抑制CRBP1、PCNA、MMP-9、TGF-β1、TβRI、p-Smad3 表达（P<0.05）;各组间t-Smad3水平未见统计学差异（P>0.05）。5.免疫荧光染色检测结果:与空白组比较,模型组显着降低α-SMA的平均免疫荧光强度,显着提高CRBP1的平均免疫荧光强度（P<0.05）;与模型组比较,化裁血府逐瘀汤含药血清能浓度依赖性增强α-SMA的平均免疫荧光强度及减弱CRBP1平均免疫荧光强度（P<0.05）。6.通过激光共聚焦定位观察发现:与空白组比较,模型组p-Smad3细胞核/细胞质的比值显着增高;与模型组比较,随着化裁血府逐瘀汤含药血清的浓度增加,p-Smad3细胞核/细胞质比值逐渐降低,逆转了核转位（P<0.05）。7.通过RT-PCR检测PCNA mRNA和MMP-9 mRNA的表达:与空白组比较,模型组PCNA mRNA和MMP-9 mRNA表达水平显着升高（P<0.05）;与模型组比较,化裁血府逐瘀汤含药血清呈浓度依赖性的抑制PCNA mRNA和MMP-9 mRNA的表达水平（P<0.05）。结论:1.运用中医传承计算平台,挖掘出导师治疗下肢动脉硬化闭塞症虚实夹杂的血脉病机,提出活血化瘀、疏补并重的治疗原则,提炼出治疗本病的基础核心主方化裁血府逐瘀汤。2.化裁血府逐瘀汤治疗下肢动脉硬化闭塞症4周后,评估患者中医症状评分、踝肱指数、红外热像,TG、TC、HDL-C等各结局指标均有改善。治疗中未见明显临床不良反应。3.化裁血府逐瘀汤含药血清通过调控TGF-β1/Smad3信号通路及相关蛋白的表达,抑制血管平滑肌细胞表型转化、增殖及迁移能力,从而达到治疗下肢动脉硬化闭塞症的作用。
宋妙妙[10]（2021）在《妊娠期糖尿病巨大儿胎盘超微结构及糖通路相关性研究》文中认为目的:探讨妊娠期糖尿病（GDM）并发巨大儿胎盘组织超微结构及葡萄糖转运蛋白的差异性改变,并分析其相关影响因素。方法:选取2020年1月-7月于西北妇女儿童医院剖宫分娩孕妇的胎盘组织15例,其中GDM并发巨大儿、正常足月巨大儿、对照组（GDM正常体重儿）孕妇的胎盘组织各5例。对分娩的胎盘第一时间进行大体检查,生理盐水冲洗后称重,记录并保留胎盘相关数据（胎盘重量、胎盘系数）。随后于电镜下观察并记录胎盘组织超微结构的相关改变,包括合体滋养细胞及表面绒毛、合体滋养细胞及毛细血管基底膜平均厚度、细胞核、线粒体、内质网、毛细血管管腔等结构的改变。其次通过免疫组织化学的方法对所取胎盘组织进行葡萄糖转运蛋白的半定量检测,并分析葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、葡萄糖转运蛋白7（GLUT7）的影响因素。结果:1.母儿相关资料结果显示:三组孕期增重、新生儿体质指数（Body Mass Index;BMI）、新生儿体重、空腹血糖比较差异均具有统计学意义（P均<0.05）,GDM并发巨大儿组孕期增重、新生儿BMI、新生儿体重最高。对照组OGTT各个不同时间点的血糖值及胰岛素抵抗指数最高。2.胎盘相关参数结果显示:三组胎盘重量、胎盘系数、合体细胞滋养细胞及毛细血管基底膜平均厚度比较差异均具有统计学意义（P均<0.05）,其中GDM并发巨大儿组明显高于其他两组。基底膜平均厚度的相关性分析中,合体滋养细胞基底膜平均厚度与孕期增厚、胎盘重量、胎盘系数、毛细血管基底膜平均厚度、新生儿体重存在正性相关（r值分别为0.825、0.872、0.804、0.908、0.851;P均<0.01）;毛细血管基底膜平均厚度与孕期增重、胎盘重量、胎盘系数、合体滋养细胞基底膜平均厚度、新生儿体重存在正相关（r值分别为0.906、0.893、0.799、0.908、0.906;P均<0.01）,毛细血管基底膜平均厚度于餐后1小时血糖、1小时胰岛素存在负相关（r=-0.647、-0.647;P均<0.05）。3.电镜超微结构结果显示:GDM并发巨大儿组胎盘电镜下的超微结构较对照组的改变为:合体滋养细胞数量减少且表面的微绒毛数量减少、分布紊乱。细胞核内的染色质呈团状高度凝集。细胞滋养细胞数量增多且结构改变明显。胞质内内质网呈网池状扩张并出现自噬现象;毛细血管增多且管腔完整,基底膜均匀增厚呈多层。正常足月巨大儿组较GDM并发巨大儿组胎盘电镜下超微结构的改变为:内质网扩张但无自噬征象。基底膜增厚且薄厚不均。其余超微结构两者相比未见明显差异。4.免疫组化结果显示:三组GLUT1的表达强度比较差异具有统计学意义（P<0.05）,GDM并发巨大儿组表达强度阳性及强阳性最多;三组GLUT4表达强度比较差异无统计学意义（P>0.05）,但对照组的表达强度弱阳性及阳性最低;三组GLUT7表达强度比较差异无统计学意义（P>0.05）,但GDM合并巨大儿的表达强度弱阳性最低。在相关性分析中,GLUT1与1小时胰岛素水平呈负相关（r=-0.764;P=0.01）,GLUT1与胎儿体重呈正相关（r=0.674;P=0.033）;GLUT4与餐后1小时血糖水平呈正相关（r=0.638;P=0.047）,GLUT4与空腹胰岛素水平呈负相关（r=-0.728;P=0.017）;GLUT7与1小时胰岛素水平呈负相关（r=-0.646;P=0.044）。结论:GDM并发巨大儿组的改变:（1）胎盘参数及结构:胎盘重量及胎盘系数增大,合体滋养细胞及毛细血管基底膜平均厚度明显增加,可能与GLUT1在基底膜的表达增强有关;细胞器存在明显改变,毛细血管增生,内质网出现自噬现象。（2）GLUT:GLUT1表达强度增加,与新生儿体重呈正相关;GLUT4表达强度降低,与胰岛素抵抗明显相关;GLIUT7表达强度最低,可能与内质网的应激性改变有关。这些相关改变影响了母儿之间的物质交换,导致了巨大儿的发生。
二、重视和加强显微镜下形态学检查（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重视和加强显微镜下形态学检查（论文提纲范文）
（1）医学形态学实验教学显微镜使用现状和管理（论文提纲范文）
| 一、医学形态学显微镜教学使用现状 |
| 二、显微镜正确的使用方法 |
| 三、显微镜使用过程中的常见问题 |
| 四、显微镜教学使用现状原因分析 |
| (一)光学显微镜规范使用的忽视 |
| (二)学生基础存在个体差异 |
| (三)教学安排进度不统一 |
| (四)有限的教学条件不适应较多的学生 |
| 五、显微镜规范使用管理初探 |
| (一)规范显微镜教学使用内容和考核体系 |
| (二)教师做好显微镜规范使用的讲解和监督指导 |
| (三)实验人员不断完善仪器管理流程 |
| (四)举办实验技能大赛 |
| (五)积极开展探索性开放性实验课程 |
| 小结 |
（2）高校医药工程学院形态学实验室的安全管理（论文提纲范文）
| 1 实验室概况及其安全隐患 |
| 2 实验室安全管理 |
| 2.1 安全教育 |
| 2.2 环境安全 |
| 2.3 水电安全 |
| 2.4 实验设备安全 |
| 2.5 教学过程安全 |
| 2.6 实验室开放安全 |
| 2.7 信息化管理安全 |
| 3 总结 |
（3）尿液形态学检验教学中存在的问题和对策（论文提纲范文）
| 1 尿液形态学教学中存在的问题 |
| 1.1 教学改革,学时减少 |
| 1.2 尿液标本的变异性 |
| 1.3 带教教师专业水平有待提高 |
| 1.4 带教意识淡薄,带教手段单一 |
| 2 改进措施 |
| 2.1 全面规范带教工作 |
| 2.2 提高带教教师专业水平 |
| 2.3 根据尿液标本特点设计实验 |
| 2.4 鼓励学生参与案例讨论 |
| 2.5 运用现代化技术优化教学手段 |
| 2.6 举办形态学竞赛,提高学生对形态学检验的重视 |
| 3 小 结 |
（4）3nm氧化铁纳米颗粒对斑马鱼胚胎发育的毒性作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 纳米颗粒的概述 |
| 1.2 铁氧纳米颗粒的研究 |
| 1.2.1 铁氧纳米颗粒的特性 |
| 1.2.2 铁氧纳米颗粒在生物医药领域的应用 |
| 1.3 超小亚五铁氧纳米颗粒的研究现状 |
| 1.4 斑马鱼在毒理学研究中的应用 |
| 1.4.1 模式生物斑马鱼 |
| 1.4.2 以斑马鱼作为血管和血细胞发育毒性的研究工具 |
| 1.4.3 以斑马鱼作为神经发育毒性的研究工具 |
| 1.4.4 以斑马鱼作为肝脏及肾脏发育毒性的研究工具 |
| 1.4.5 以斑马鱼作为肝脏及肾脏发育毒性的研究工具 |
| 1.4.6 以斑马鱼作为骨骼发育毒性的研究工具 |
| 1.5 斑马鱼胚胎在纳米毒理学中的应用 |
| 1.6 转录组测序技术和加权共表达网络分析 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 第二章 不同尺寸氧化铁纳米颗粒的毒理学研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 溶液配制 |
| 2.2.4 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 不同尺寸的FeNPs制备与表征 |
| 2.3.2 FeNPs对斑马鱼胚胎的处理 |
| 2.3.3 胚胎活力统计分析 |
| 2.3.4 氧化胁迫和细胞凋亡检测 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 3 nm FeNPs的表征 |
| 2.4.2 FeNPs对斑马鱼胚胎活力的影响 |
| 2.4.3 FeNPs导致的斑马鱼胚胎的畸形率 |
| 2.4.4 FeNPs对斑马鱼胚胎的氧化胁迫作用 |
| 2.4.5 FeNPs处理斑马鱼胚胎后的凋亡检测 |
| 2.5 小结和讨论 |
| 第三章 不同尺寸FeNPs对斑马鱼器官发育的形态学影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 血红蛋白染色 |
| 3.3.2 原位杂交 |
| 3.3.3 油红染色 |
| 3.3.4 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 FeNPs对斑马鱼的心脏发育的影响 |
| 3.4.2 FeNPs对斑马鱼的血管发育的影响 |
| 3.4.3 FeNPs对斑马鱼的肝脏发育的影响 |
| 3.4.4 FeNPs对斑马鱼肾脏发育的影响 |
| 3.4.5 FeNPs对斑马鱼软骨发育的影响 |
| 3.5 小结和讨论 |
| 第四章 FeNPs对斑马鱼神经肌肉和运动系统发育的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 图像数据分析 |
| 4.3.2 行为学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 FeNPs影响斑马鱼胚胎的神经发育 |
| 4.4.2 3 nm FeNPs影响斑马鱼胚胎骨骼肌发育 |
| 4.4.3 不同粒径FeNPs对斑马鱼自发运动的影响 |
| 4.4.4 斑马鱼胚胎的运动轨迹分析 |
| 4.5 小结和讨论 |
| 第五章 3 nm FeNPs对不同时期的斑马鱼胚胎的转录组水平的毒性分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 样品准备 |
| 5.2.2 高通量测序流程 |
| 5.2.3 RNA-Seq数据过滤与分析 |
| 5.2.4 实时定量荧光PCR |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 总RNA质检结果 |
| 5.3.2 RNA-Seq数据过滤和Reads的表达分布 |
| 5.3.3 斑马鱼胚胎发育不同时期的差异基因表达及分析 |
| 5.3.4 实时定量PCR验证数据可靠性 |
| 5.4 小结和讨论 |
| 第六章 加权共表达网络分析挖掘3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎发育的毒性的关键基因 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 差异表达基因共表达模块的构建 |
| 6.4.2 模块内基因GO功能和KEGG pathway富集分析 |
| 6.4.3 关键hub基因的筛选 |
| 6.4.4 特定模块的共表达网络分析 |
| 6.5 小结与讨论 |
| 6.5.1 hub基因plcd1a对神经肌肉的毒性分析 |
| 6.5.2 hub基因prkcdb涉及的涉及的过氧化损伤和炎性反应 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 本文的主要结论 |
| 7.2 本文的创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 转录组测序Clean reads的数量 |
| 附录二 转录组测序Clean reads参考基因组比对 |
| 附录三 引物序列表 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）SNX10在小鼠创伤性骨关节炎运动干预中的作用研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 第一部分:运动对创伤性骨关节炎小鼠膝关节软骨SNX10 的影响 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分:SNX10 缺失在创伤性骨关节炎小鼠膝关节软骨损伤中的作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分:机械牵张力刺激下SNX10 缺失对软骨细胞修复的作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验(一)不同机械牵张时间对软骨细胞SNX10 及相关软骨代谢因子的影响 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 3 实验(二)机械牵张力刺激下SNX10 缺失对软骨细胞修复的作用 |
| 3.1 实验材料与方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 1 主要结论 |
| 2 研究意义及创新 |
| 3 研究局限及展望 |
| 正文参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（6）芸薹属基本种扩展蛋白基因家族的进化分析及花粉发育相关扩展蛋白基因的功能分化研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 缩略词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 植物扩展蛋白基因家族的研究进展 |
| 1.1.1 扩展蛋白的结构特点和起源 |
| 1.1.1.1 扩展蛋白的结构特点 |
| 1.1.1.2 扩展蛋白基因的起源 |
| 1.1.2 不同植物扩展蛋白基因家族成员的比较 |
| 1.1.3 进化过程中扩展蛋白基因亚家族的基因结构和结构域较保守 |
| 1.1.4 扩展蛋白基因在染色体上广泛分布 |
| 1.1.5 染色体片段重复是扩展蛋白基因家族主要扩张模式 |
| 1.1.6 扩展蛋白基因在不同植物组织中的表达丰度不同 |
| 1.2 扩展蛋白在植物生长发育中的作用 |
| 1.2.1 扩展蛋白基因在植物营养生长中的功能 |
| 1.2.1.1 种子萌发 |
| 1.2.1.2 根的生长发育 |
| 1.2.1.3 叶片的生长发育 |
| 1.2.2 扩展蛋白基因在植物生殖生长中的功能和调控 |
| 1.2.2.1 花粉管发育 |
| 1.2.2.2 果实成熟软化 |
| 1.3 花粉内壁的发育和调控 |
| 1.3.1 花粉壁的形成 |
| 1.3.2 花粉内壁发育的调控 |
| 1.3.2.1 参与拟南芥花粉内壁发育的基因及其调控机制 |
| 1.3.2.2 参与水稻花粉内壁发育的基因及其调控机制 |
| 1.4 花粉管的发育和调控 |
| 1.4.1 花粉管壁的组成和发育 |
| 1.4.2 细胞壁组分对花粉管生长的影响 |
| 1.4.2.1 果胶合成 |
| 1.4.2.2 纤维素合成 |
| 1.4.3 花粉管生长过程中细胞壁的重塑 |
| 1.4.3.1 细胞壁扩展蛋白和糖苷酶水解蛋白 |
| 1.4.3.2 阿拉伯半乳糖蛋白 |
| 1.4.3.3 果胶甲酯酶和果胶乙酰化酶 |
| 1.4.4 花粉管细胞壁结构蛋白的信号通路 |
| 1.4.4.1 细胞壁结构蛋白LRXs |
| 1.4.4.2 快速碱化因子家族RALFs |
| 1.4.4.3 类受体激酶CrRLK1Ls——ANX1/2和BUPS1/2 |
| 2 芸薹属三个基本种扩展蛋白基因家族的鉴定和进化分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 植物材料和主要试剂 |
| 2.1.2 扩展蛋白家族成员的鉴定和理化性质预测 |
| 2.1.3 扩展蛋白家族成员系统发育遗传树的构建与结构分析 |
| 2.1.4 扩展蛋白家族基因的染色体分布、共线性和保留率分析 |
| 2.1.5 扩展蛋白家族基因编码序列和启动子的进化分析 |
| 2.1.6 扩展蛋白家族基因的表达分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 芸薹属基本种扩展蛋白基因家族的鉴定 |
| 2.2.2 扩展蛋白基因的系统发育、基因结构和功能域分析 |
| 2.2.3 扩展蛋白基因的染色体分布、复制机制和保留比例 |
| 2.2.4 扩展蛋白基因的编码序列和启动子的进化分析 |
| 2.2.5 扩展蛋白家族成员的表达模式 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 全基因组三倍化后芸薹属三个基本种的扩展蛋白基因家族规模 |
| 2.3.2 芸薹属三个基本种中EXLB亚家族在进化上最为保守 |
| 2.3.3 启动子的变异与扩展蛋白基因的编码序列进化密切相关 |
| 2.3.4 扩展蛋白基因在白菜生殖发育中可能扮演重要的角色 |
| 3 白菜扩展蛋白基因BrEXPB4和BrEXPB9 的表达模式和功能鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 植物材料和主要试剂 |
| 3.1.2 CTAB法提取基因组DNA |
| 3.1.3 总RNA 的提取(试剂盒法)与cDNA 的合成 |
| 3.1.4 BrEXPB4和BrEXPB9 的基因编码序列和启动子序列的扩增 |
| 3.1.5 氨基酸序列的特征分析 |
| 3.1.6 荧光定量PCR分析 |
| 3.1.7 proBrEXPB4::GUS和 proBrEXPB9::GUS融合表达载体的构建 |
| 3.1.8 BrEXPB4::eGFP和 BrEXPB9::eGFP融合表达载体的构建 |
| 3.1.9 人工microRNA(amiRNA)载体的构建 |
| 3.1.9.1 amiRNA序列的设计与合成 |
| 3.1.9.2 p35S::ami REXPB4/9、p35S::amiREXPB4和p35S::ami REXPB9 载体的构建 |
| 3.1.10 proBrEXPB4::GUS和 proBrEXPB9::GUS载体的遗传转化 |
| 3.1.10.1 proBrEXPB4::GUS和 proBrEXPB9::GUS载体浸花法转化野生型拟南芥 |
| 3.1.10.2 阳性转基因拟南芥植株的筛选 |
| 3.1.10.3 阳性植株组织的GUS染色观察 |
| 3.1.11 BrEXPB4和BrEXPB9 的亚细胞定位 |
| 3.1.11.1 利用烟草表皮细胞瞬时转化体系观察目标蛋白的亚细胞定位 |
| 3.1.11.2 利用洋葱表皮细胞瞬时转化体系观察目标蛋白的亚细胞定位 |
| 3.1.12 利用抽真空浸花法将amiRNA载体转化‘油青四九’菜心 |
| 3.1.13 菜心阳性转基因植株的筛选鉴定 |
| 3.1.13.1 转基因菜心基因组DNA的提取 |
| 3.1.13.2 利用PCR对转基因菜心植株进行初次筛选 |
| 3.1.13.3 利用qRT-PCR对转基因菜心植株进行再次筛选 |
| 3.1.14 阳性转基因菜心植株的表型观察 |
| 3.1.14.1 植株的形态学观察和角果长度的统计 |
| 3.1.14.2 花粉的细胞学染色观察 |
| 3.1.14.3 花粉的扫描电镜观察 |
| 3.1.14.4 花粉的半薄切片和透射电镜观察 |
| 3.1.14.5 花粉的体内萌发 |
| 3.1.14.6 花粉的体外萌发 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 成功扩增‘油青四九’菜心中BrEXPB4和BrEXPB9 的编码序列和启动子序列 |
| 3.2.2 BrEXPB4和BrEXPB9 主要在成熟花粉粒和花粉管中表达 |
| 3.2.2.1 BrEXPB4和BrEXPB9 主要在‘Bcajh97-01’的花序、三核花粉期以及授粉受精后优势表达 |
| 3.2.2.2 BrEXPB4和BrEXPB9 从单核晚期花粉中起始表达并持续到花粉管中 |
| 3.2.3 BrEXPB4和BrEXPB9 定位在细胞壁上 |
| 3.2.4 BrEXPB4和BrEXPB9 定位在细胞壁上 |
| 3.2.5 同时抑制BrEXPB4和BrEXPB9 的表达造成花粉和花粉管的发育异常 |
| 3.2.5.1 利用amiRNA技术实现对菜心中BrEXPB4和BrEXPB9 的表达抑制 |
| 3.2.5.2 抑制BrEXPB4和BrEXPB9 的表达不会影响菜心的营养生长和花器官形态 |
| 3.2.5.3 同时抑制BrEXPB4和BrEXPB9 的表达导致花粉败育以及花粉萌发和伸长异常 |
| 3.2.5.4 BrEXPB4/9~(KD)的花粉败育发生在单核花粉晚期,导致花粉内容物含量降低并伴随异常的内壁沉积 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 BrEXPB4和BrEXPB9 具有相似的表达模式和亚细胞定位 |
| 3.3.2 BrEXPB4和BrEXPB9 冗余地参与白菜花粉发育和花粉管萌发 |
| 3.3.3 BrEXPB4和BrEXPB9 通过调控花粉内壁的沉积影响花粉管的萌发 |
| 4 拟南芥EXPA4和EXPB5 的表达模式和功能鉴定 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 植物材料和主要试剂 |
| 4.1.2 CTAB法提取基因组DNA |
| 4.1.3 总RNA 的提取与cDNA 的合成 |
| 4.1.3.1 Trizol法提取总RNA |
| 4.1.3.2 cDNA的合成 |
| 4.1.4 AtEXPA4和AtEXPB5 的基因全长序列、编码序列和启动子序列的扩增 |
| 4.1.5 氨基酸序列的特征分析和启动子顺式作用元件分析 |
| 4.1.6 荧光定量PCR分析 |
| 4.1.7 proAtEXPA4::GUS和 proAtEXPB5::GUS融合表达载体的构建 |
| 4.1.8 AtEXPA4::eGFP和 AtEXPB5::eGFP融合表达载体的构建 |
| 4.1.9 AtEXPA4和AtEXPB5 敲除载体的构建 |
| 4.1.9.1 AtEXPA4和AtEXPB5 sgRNA的设计合成及中间载体的构建 |
| 4.1.9.2 构建以proYAO启动子驱动Cas9 表达的CRISPR/Cas9 载体 |
| 4.1.10 过表达载体proAtEXPA4::EXPA4和proAtEXPB5::EXPB5 的构建 |
| 4.1.11 利用浸花法将各载体转化野生型拟南芥以及T_1代抗性植株的筛选 |
| 4.1.11.1 通过浸花法对拟南芥进行遗传转化 |
| 4.1.11.2 T_1代抗性植株的筛选 |
| 4.1.12 proAtEXPA4::GUS和 proAtEXPB5::GUS植株的筛选和观察 |
| 4.1.13 AtEXPA4和AtEXPB5 的亚细胞定位 |
| 4.1.13.1 利用烟草表皮细胞瞬时转化体系观察目标蛋白的亚细胞定位 |
| 4.1.13.2 利用洋葱表皮细胞瞬时转化体系观察目标蛋白的亚细胞定位 |
| 4.1.14 敲除植株的筛选鉴定 |
| 4.1.14.1 通过PCR检测敲除植株的T-DNA插入情况 |
| 4.1.14.2 敲除植株的基因编辑检测 |
| 4.1.14.3 敲除纯合植株的筛选 |
| 4.1.15 双突变体atexpa4expb5 的获得和F_2代基因分离比的统计 |
| 4.1.16 利用PCR和 qRT-PCR对过表达植株进行筛选和鉴定 |
| 4.1.17 双突变体atexpa4expb5 的回补实验 |
| 4.1.17.1 过表达载体proAtEXPA4::EXPA4和proAtEXPB5::EXPB5对atexpa4expb5 的遗传转化 |
| 4.1.17.2 利用PCR和 qRT-PCR对回补植株进行筛选 |
| 4.1.18 敲除、过表达以及回补植株的表型观察 |
| 4.1.18.1 植株的形态学观察 |
| 4.1.18.2 花粉的细胞学染色观察 |
| 4.1.18.3 花粉的扫描电镜观察 |
| 4.1.18.4 花粉的体内萌发 |
| 4.1.18.5 主根长度和根尖分生区长度的测量与统计 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 AtEXPA4和AtEXPB5 的基因全长序列、编码序列和启动子序列 |
| 4.2.2 AtEXPA4和AtEXPB5 的表达分析 |
| 4.2.3 AtEXPA4和AtEXPB5 定位在细胞壁上 |
| 4.2.4 AtEXPA4和AtEXPB5 突变体、过表达以及回补植株的获得 |
| 4.2.4.1 atexpa4和atexpb5株系T-DNA插入和基因编辑类型的统计 |
| 4.2.4.2 AtEXPA4和AtEXPB5 敲除植株的脱靶检测 |
| 4.2.4.3 通过杂交获得AtEXPA4和AtEXPB5 双突变体atexpa4expab5 |
| 4.2.4.4 导入过表达载体使野生型拟南芥和atexpa4expab5 中相应基因的表达量升高 |
| 4.2.5 AtEXPA4和AtEXPB5 的同时突变使花粉管伸长速度减缓 |
| 4.2.5.1 AtEXPA4和AtEXPB5 的突变和过量表达对植株形态和花粉发育未观察到显着影响 |
| 4.2.5.2 双突变体atexpa4expab5 的花粉管伸长速度减缓 |
| 4.2.5.3 AtEXPA4和AtEXPB5 的突变对花粉的竞争力和配子传递无明显影响 |
| 4.2.6 AtEXPA4或AtEXPB5 都可以恢复atexpa4expab5 花粉管的伸长速度 |
| 4.2.7 AtEXPA4 促进主根的伸长 |
| 4.2.8 AtEXPA4和AtEXPB5 的启动子上顺式作用元件的分布情况 |
| 4.2.9 AtEXPA4和AtEXPB5 的启动子上顺式作用元件的分布情况 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 AtEXPA4和AtEXPB5 冗余地参与花粉管的发育 |
| 4.3.2 AtEXPA4 参与主根的生长发育 |
| 4.3.3 AtEXPA4和AtEXPB5 可能在MYB转录因子的调控下参与花粉管的发育 |
| 5 AtEXPA4和AtEXPB5 与其白菜中的同源基因的功能分化 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 植物材料和主要试剂 |
| 5.1.2 转录因子TDF1、AMS和 MYB结合位点的分析 |
| 5.1.3 酵母单杂交实验 |
| 5.1.3.1 TFs-AD和 proBrEXPB4A-E-AbAi、proBrEXPB9A-C-Ab Ai、pAtEXPB5A-Ab Ai载体的构建 |
| 5.1.3.2 线性化启动子载体并转化Y1H感受态细胞 |
| 5.1.3.3 检测转录因子对目的基因的调控作用 |
| 5.1.4 双荧光素酶实验 |
| 5.1.4.1 报告器载体proBrEXPB4-LUC、proBrEXPB9-LUC、pAtEXPB5A-LUC和效应器载体TFs-SK的构建 |
| 5.1.4.2 效应器和报告器质粒电击法转化农杆菌GV3101(MP90)感受态细胞 |
| 5.1.4.3 效应器和报告器载体瞬时转化烟草叶片并检测荧光强度 |
| 5.1.5 qRT-PCR分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 TDF1和AMS对白菜EXPB4/9 和拟南芥EXPB5 的转录激活分析 |
| 5.2.2 其他转录因子与BrEXPB4和BrEXPB9 的启动子结合分析 |
| 5.2.3 BrEXPA11/19/22 的表达模式及其在BrEXPB4/9~(KD)中的表达分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 AtEXPB5 与其在白菜中的同源基因BrEXPB4和BrEXPB9 产生功能分化 |
| 5.3.2 AtEXPB5和BrEXPB4/9 参与不同的调控路径 |
| 5.3.3 白菜扩展蛋白基因家族在进化过程中产生功能分化 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表的论文 |
（7）连翘归尾煎抗乳腺癌药效作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号表 |
| 前言 |
| 第一章 连翘归尾煎体内抗乳腺癌药效作用研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验细胞及实验动物 |
| 1.2 实验药材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 连翘归尾煎样品制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 乳腺癌荷瘤小鼠模型的建立 |
| 2.4 数据分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 连翘归尾煎对乳腺癌小鼠体重的影响 |
| 3.2 连翘归尾煎对乳腺癌小鼠模型的肿瘤生长的影响 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第二章 基于网络药理学探讨连翘归尾煎抗乳腺癌的作用机制 |
| 1.资料与方法 |
| 1.1 连翘归尾煎有效活性成分及靶基因的收集和筛选 |
| 1.2 乳腺癌相关靶基因的收集 |
| 1.3 有效成分与疾病靶基因的Venn分析 |
| 1.4 构建“药物-成分-靶基因-疾病”网络 |
| 1.5 构建蛋白互作关系网络 |
| 1.6 核心靶基因GO(基因本体论)分析和KEGG富集分析 |
| 2.实验结果 |
| 2.1 连翘归尾煎有效活性成分及靶基因的收集 |
| 2.2 连翘归尾煎抗乳腺癌相关靶基因 |
| 2.3 “药物-成分-靶基因-疾病”网络 |
| 2.4 蛋白互作网络构建 |
| 2.5 GO功能富集分析结果 |
| 2.6 KEGG通路富集分析结果 |
| 3.小结 |
| 第三章 连翘归尾煎抗乳腺癌作用机制研究 |
| 第一节 连翘归尾煎体外抗乳腺癌作用机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 CCK-8法检测细胞的增殖 |
| 2.3 Hoechst33258 染色观察细胞凋亡 |
| 2.4 qRT-PCR法检测细胞内相关蛋白mRNA的表达 |
| 2.5 Western blot法测定细胞内相关蛋白表达水平 |
| 2.6 数据分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 连翘归尾煎对细胞的增殖抑制作用 |
| 3.2 连翘归尾煎对细胞凋亡的影响 |
| 3.3 连翘归尾煎对细胞内相关蛋白mRNA表达的影响 |
| 3.4 连翘归尾煎对细胞内相关蛋白表达水平的影响 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第二节 连翘归尾煎体内抗乳腺癌作用机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验组织 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验取材 |
| 2.2 组织石蜡包埋与切片 |
| 2.3 HE染色观察肿瘤组织形态学变化 |
| 2.4 TUNEL染色测定肿瘤组织细胞凋亡率 |
| 2.5 Western blot测定乳腺癌小鼠肿瘤组织中相关蛋白表达 |
| 2.6 数据分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 连翘归尾煎对乳腺癌小鼠肿瘤组织学的影响 |
| 3.2 连翘归尾煎对乳腺癌小鼠肿瘤组织中相关蛋白表达的影响 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第四章 基于分子对接技术预测连翘归尾煎抗乳腺癌的活性成分及验证 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 分子对接 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 不同化学成分对细胞的增殖抑制作用 |
| 3.结果 |
| 3.1 连翘归尾煎中核心活性化合物分子对接结果分析 |
| 3.2 不同活性成分对细胞的增殖抑制作用 |
| 3.3 牛蒡子苷及白桦脂酸的分子对接结果分析 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 中医药治疗乳腺癌研究进展中医药治疗乳腺癌的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）川芎嗪对结肠癌细胞的抑瘤效应及改变线粒体活性氧代谢介导凋亡通路的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一章 中医对结直肠癌病因病机及治疗的认识 |
| 1. 引言 |
| 2. 病症名称的历史沿革 |
| 3. 结直肠癌病因病机 |
| 4. 结直肠癌中医证候研究现状 |
| 5. 结直肠癌中医药治疗 |
| 6. 单味中药及其主要成分治疗结直肠癌的实验研究 |
| 7. 展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 川芎研究概述 |
| 1. 引言 |
| 2. 川芎的历史沿革 |
| 3. 川芎的功效与应用 |
| 4. 川芎主要有效成分川芎嗪的药理作用及临床外科应用 |
| 5. 展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 川芎嗪在消化系统肿瘤中的抗癌机制研究进展 |
| 1. 引言 |
| 2. 抑制肿瘤细胞增殖 |
| 3. 促进肿瘤细胞凋亡和自噬 |
| 4. 诱导肿瘤细胞活性氧的生成 |
| 5. 抑制肿瘤细胞侵袭与转移 |
| 6. 抑制肿瘤组织血管生成 |
| 7. 逆转肿瘤细胞多药耐药 |
| 8. 展望 |
| 参考文献 |
| 第四章 活性氧信号通路与肿瘤的研究进展 |
| 1. 引言 |
| 2. ROS的来源与调节 |
| 2.1 ROS的来源 |
| 2.2 ROS的调节 |
| 3. ROS相关信号通路 |
| 3.1 ROS促进细胞增殖 |
| 3.2 DNA损伤和遗传不稳定 |
| 3.3 适应性 |
| 3.4 细胞死亡 |
| 3.5 自噬 |
| 3.6 抗药性 |
| 4. ROS在肿瘤治疗中的作用 |
| 4.1 诱导肿瘤细胞死亡 |
| 4.2 抑制肿瘤细胞增殖 |
| 5. 展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 川芎嗪对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响 |
| 引言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试剂配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 细胞形态学实验 |
| 2.3 结晶紫染色测定细胞活性 |
| 2.4 CCK-8法检测细胞增殖 |
| 2.5 细胞周期检测 |
| 2.6 Annexin V/PI凋亡检测 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 TMP显着抑制结肠癌细胞增殖 |
| 3.2 TMP对结肠癌细胞的抑制作用具有浓度和时间依赖性 |
| 3.3 TMP通过抑制结肠癌细胞周期S期合成抑制细胞增殖 |
| 3.4 TMP诱导结肠癌细胞发生凋亡 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 活性氧对川芎嗪诱导的结肠癌细胞凋亡的调控机制研究 |
| 引言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要试剂配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 DCFH-DA探针细胞内ROS检测 |
| 2.2 蛋白印迹实验（Western blot) |
| 2.3 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 TMP通过促进细胞内ROS产生来诱导结肠癌细胞发生凋亡 |
| 3.2 使用DCFH-DA探针检测结肠癌细胞内ROS的变化情况 |
| 3.3 TMP通过ROS介导结肠癌细胞发生线粒体途径凋亡 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 川芎嗪在裸鼠移植肿瘤中诱导凋亡作用 |
| 引言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 主要材料 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 裸鼠移植肿瘤模型 |
| 2.2 丙二醛(MDA)检测 |
| 2.3 Caspase 3和Caspase 9蛋白活性检测 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 TMP在裸鼠移植肿瘤中具有抑制肿瘤增殖的效果 |
| 3.2 TMP增加裸鼠移植肿瘤内ROS积累并诱导凋亡 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 总结与展望 |
| 附录 |
| 攻读博士期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）化裁血府逐瘀汤治疗下肢动脉硬化闭塞症的作用机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 综述 |
| 1 中医对下肢动脉硬化闭塞症的认识 |
| 1.1 病名来源 |
| 1.2 脱疽的病因病机 |
| 1.3 中医治疗ASO的研究进展 |
| 2 西医对下肢动脉硬化闭塞症的认识 |
| 2.1 定义及发病机制 |
| 2.2 危险因素 |
| 2.3 西医对下肢动脉硬化闭塞症的治疗进展 |
| 第一部分 基于数据挖掘的导师诊治下肢动脉硬化闭塞症医案回顾性研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象 |
| 2.1 病案来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 3 研究方法 |
| 3.1 病案资料收集与录入信息 |
| 3.2 数据整理与挖掘 |
| 4 结果 |
| 4.1 患者基本信息统计 |
| 4.2 中医证型结果 |
| 4.3 用药频次统计 |
| 4.4 药物四气、五味、归经统计 |
| 4.5 方剂组方规律统计 |
| 5 讨论 |
| 第二部分 化裁血府逐瘀汤治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 样本量的估算 |
| 1.2 研究对象 |
| 1.3 纳人及排除标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 干预方法 |
| 2.2 观察指标 |
| 2.3 疗效评价标准 |
| 2.4 安全指标检测 |
| 2.5 统计分析方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 人组情况 |
| 3.2 两组患者一般资料的比较 |
| 3.3 两组患者中医症状评分比较 |
| 3.4 两组患者ABI指数的比较 |
| 3.5 两组患者下肢皮肤温度变化 |
| 3.6 两组患者血脂的比较 |
| 3.7 两组患者hs-CRP的比较 |
| 3.8 两组患者FIB的比较 |
| 3.9 两组患者治疗后临床疗效比较 |
| 3.10 安全性评价及不良反应 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 化裁血府逐瘀汤含药血清对血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 主要实验仪器和试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞形态 |
| 2.2 化裁血府逐瘀汤含药血清对ox-LDL诱导VSMCs增殖的影响 |
| 2.3 化裁血府逐瘀汤含药血清对ox-LDL诱导VSMCs迁移的影响 |
| 2.4 化裁血府逐瘀汤含药血清对ox-LDL诱导VSMCs内α-SMA、CRBP1蛋白表达水平的影响 |
| 2.5 化裁血府逐瘀汤含药血清对ox-LDL诱导VSMCs内α-SMA、CRBP1免疫荧光强度的影响 |
| 2.6 化裁血府逐瘀汤含药血清对ox-LDL诱导VSMCs中PCNA、MMP-9蛋白表达水平的影响 |
| 2.7 化裁血府逐瘀汤含药血清对ox-LDL诱导VSMCs中PCNA mRNA、MMP-9 mRNA表达水平的影响 |
| 2.8 化裁血府逐瘀汤含药血清对TGF-β1/Smad3相关蛋白表达水平的影响 |
| 2.9 激光共聚焦定位及检测VSMCs中p-Smad3的表达 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附表 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（10）妊娠期糖尿病巨大儿胎盘超微结构及糖通路相关性研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 妊娠期间糖尿病的概述 |
| 1.2.1 妊娠期间糖尿病的定义 |
| 1.2.2 妊娠期间糖尿病的诊断 |
| 1.2.2.1 GDM的诊断 |
| 1.2.2.2 PGDM的诊断 |
| 1.3 巨大儿的概述 |
| 1.3.1 巨大儿的定义及相关高危因素 |
| 1.3.2 GDM并发巨大儿的预测及诊断 |
| 1.3.3 妊娠期糖尿病合并巨大儿的机制 |
| 1.4 胎盘的概述 |
| 1.4.1 正常的胎盘结构 |
| 1.4.2 胎盘的生理功能 |
| 1.4.3 胎盘的血液循环 |
| 1.4.4 妊娠期糖尿病胎盘及其并发巨大儿胎盘超微结构的改变 |
| 1.5 葡萄糖转运蛋白的概述 |
| 1 材料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 纳排标准 |
| 1.3 诊断标准 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 个人简历 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 致谢 |
四、重视和加强显微镜下形态学检查（论文参考文献）
- [1]医学形态学实验教学显微镜使用现状和管理[J]. 李韵冰. 科技风, 2021(36)
- [2]高校医药工程学院形态学实验室的安全管理[J]. 张丽华,寻阳,曾煦欣,郭嘉亮. 广东化工, 2021(15)
- [3]尿液形态学检验教学中存在的问题和对策[J]. 钱香,杨淑娴,王敏,任真. 检验医学与临床, 2021(15)
- [4]3nm氧化铁纳米颗粒对斑马鱼胚胎发育的毒性作用机制的研究[D]. 寇瑶. 西北大学, 2021(11)
- [5]SNX10在小鼠创伤性骨关节炎运动干预中的作用研究[D]. 王淼. 上海体育学院, 2021(09)
- [6]芸薹属基本种扩展蛋白基因家族的进化分析及花粉发育相关扩展蛋白基因的功能分化研究[D]. 刘维妙. 浙江大学, 2021(01)
- [7]连翘归尾煎抗乳腺癌药效作用及机制研究[D]. 翟康欣. 山西中医药大学, 2021(09)
- [8]川芎嗪对结肠癌细胞的抑瘤效应及改变线粒体活性氧代谢介导凋亡通路的机制研究[D]. 李华. 南京中医药大学, 2021(01)
- [9]化裁血府逐瘀汤治疗下肢动脉硬化闭塞症的作用机制[D]. 王继雪. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [10]妊娠期糖尿病巨大儿胎盘超微结构及糖通路相关性研究[D]. 宋妙妙. 西安医学院, 2021(01)