一、P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义（论文文献综述）
戴芳[1]（2021）在《CMTM6表达促进肺癌增殖侵袭及机制研究》文中研究表明[目的]肺癌是世界上发病率和死亡率最高,增长最快的恶性肿瘤之一,是全球男性和女性癌症死亡的主要原因。肺癌病理类型包括非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）,超过85%的病例为非小细胞肺癌。非小细胞肺癌具有遗传和细胞异质性。虽然在肺癌的诊断和治疗上取得了长足的进步,但是NSCLC的总体治愈率和生存率仍然很低,尤其是在转移性疾病中。肺癌发生和转移的具体分子机制目前还不完全清楚。肺癌的发生和侵袭是一个复杂而动态的过程,涉及肿瘤组织的内在遗传异常及其与免疫系统的相互作用。鉴于此,深入研究肺癌的发生、发展和转移的机制,对开发有效的治疗措施、提高肺癌的生存率具有重要的临床价值和社会效益。近年来发现,CMTM6 基因（chemokine-like MARVEL transmembrane domain containing family member 6）与肿瘤免疫逃逸有关。此基因又名趋化素样因子超家族6。该基因位于3号染色体短臂2区2带3亚带,其编码的蛋白质产物具有四次跨膜蛋白超家族（TM4SF）和MARVEL结构域,因此与多种肿瘤密切相关。研究显示CMTM6和PD-L1共同定位于肿瘤细胞表面,呈正相关,CMTM6通过稳定肿瘤细胞表面PD-L1分子,从而使T细胞抑制,使肿瘤细胞逃脱T细胞杀伤。然而CMTM6和PD-L1的表达不完全呈正相关,表明CMTM6不只与PD-L1相关,可能还有其它的重要分子和CMTM6相互作用共同影响肿瘤预后。同时其它研究显示CMTM6在多种肿瘤组织中表达,与肿瘤预后不良有非常密切的关系。但在原发肺肿瘤中表达及与预后的关系尚未清楚,且CMTM6在肺癌发生发展中的功能及分子机制亦知之甚少。同时,CMTM6作为一种新的生物标志物,对其功能的研究还远远不够。为此本课题拟检测CMTM6在非小细胞肺癌中的表达情况,分析其表达与相关临床病理参数之间的关系;通过体内外实验,研究肺癌发生、发展和转移过程中的作用;探究CMTM6调节肺癌细胞增殖和侵袭的机制。[方法]1.利用免疫组织化学检测石蜡标本非小细胞肺癌组织、正常肺组织中CMTM6的表达,并分析CMTM6的表达与肿瘤分化、分期、转移和临床预后等相关临床病理参数的关系;2.建立干扰CMTM6的稳转肺癌细胞株,通过体外MTT实验,平板克隆形成实验,流式细胞检测凋亡检测肿瘤细胞的增殖能力;通过划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力;Transwell实验检测肿瘤细胞的侵袭能力。3.体内实验:用干扰CMTM6的稳转肺癌细胞株建立裸鼠皮下肺癌移植瘤模型,检测CMTM6在裸鼠体内对肺癌细胞增殖的影响;检测裸鼠心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠有无肿瘤侵袭。4.利用转录组测序筛选CMTM6差异表达基因,通过对敲低CMTM6的肺癌细胞和对照组肺癌细胞mRNA基因表达量的统计,找出差异表达基因;对差异基因进行GO功能富集和KEGG信号通路富集;构建蛋白质互作网络并用cytoscape软件进行了可视化,提取和CMTM6相互作用的核心基因;构建了差异基因-信号通路网络,提取主要作用信号通路的相关蛋白。5.差异表达基因验证:通过流式细胞术检测干扰CMTM6肺癌细胞周期分布;通过western blot检测干扰CMTM6后细胞周期相关蛋白P53,P21,P27,Cyclin A,Cyclin D,Cyclin E,CDK2,CDK4 和 ERK,pERK,AKT,pAKT 的表达情况。[结 果]一、CMTM6在肺癌组织中的表达1.免疫组化结果显示CMTM6阳性表达主要定位于细胞膜和细胞质,呈棕褐色或棕黄色。2.肺癌组织CMTM6蛋白表达水平（161.04±86.60）高于邻近正常肺组织（71.20±45.10）（P<0.05）。3.CMTM6表达与肿瘤T分期、肿瘤组织学类型和肿瘤浸润淋巴细胞相关（P<0.05）,与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结浸润无关。4.Kaplan-Meier生存分析结果显示,CMTM6高表达患者的5年总体生存期明显短于低表达患者（P<0.01）。二、CMTM6促进肺癌细胞增殖和迁移、侵袭能力1.体外实验:MTT结果显示,CMTM6干扰的稳转肺癌株生长速度显着慢于对照组（P<0.01）。平板克隆形成实验显示,CMTM6干扰的稳转肺癌株克隆形成的数量显着少于对照组（P<0.05）。流式细胞术检测凋亡结果显示,CMTM6干扰稳转肺癌株凋亡率高于对照组（P<0.05）。划痕实验结果显示,CMTM6干扰的稳转肺癌株细胞迁移的速度明显减慢（P<0.05）。Transwell实验结果显示,CMTM6干扰稳转肺癌株侵袭细胞的数量明显少于对照组（P<0.05）。2.体内实验:裸鼠皮下成瘤实验表明,与对照组相比,CMTM6干扰的稳转肺癌株肿瘤生长速度较慢,肿瘤体积较小（P<0.05）。免疫组化结果显示,CMTM6干扰组的Ki-67阳性率（39.6%）显着低于对照组（76.4%）（P<0.05）。裸鼠心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠HE检测未见转移瘤。三、CMTM6调节肺癌细胞增殖和侵袭的机制1.转录组测序得到CMTM6差异表达基因4993个,上调基因2466个,下调基因2527个。2.对这些基因进行GO功能富集和KEGG信号通路富集,发现CMTM6差异表达基因在生物学过程主要富集在有丝分裂细胞周期相变,DNA复制和染色体分离。细胞组成主要富集在染色体,着丝粒区,染色体区和着丝粒。分子功能主要集中在作用于DNA的催化活性,核孔结构组成和微管蛋白结合。3.KEGG信号通路主要富集在DNA复制,细胞周期和碱基切除修复。4.蛋白质互作网络提取与CMTM6相互作用的核心基因10个,分别为UBC,TP53,PRDM10,HSP90AA1,TSPO,UBB,CDK1,TOP2A,CAD,CDK2。5.差异基因-信号通路网络得到主要作用信号通路的相关蛋白。作用P53信号通路的主要由TP53,CDK1,CDK2,CCND1,CCND3等。作用于细胞周期信号通路的主要有TP53,CDK1,CDK2,CDK6,CCNB1等。作用于DNA复制信号通路的主要有MCM2,MCM5,MCM7,POLE2,LIG1等。6.CMTM6差异表达的基因主要富集在细胞周期。7.流式细胞仪检测细胞周期结果显示,干扰CMTM6则使细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞不能进入G2/M期,抑制细胞增殖。8.western blot 检测细胞周期相关蛋白 P53,P21,P27,CyclinA,CyclinD,Cyclin E,CDK2,CDK4的表达,干扰CMTM6可以通过激活P53,进一步诱导P27基因的表达,从而抑制Cyclin A的活性,将细胞周期阻滞在G0/G1期。9.western blot 检测 ERK,pERK,AKT,pAKT 蛋白表达,结果显示 CMTM6干扰稳转肺癌株下调了 pERK的表达,抑制ERK的磷酸化,但对AKT没有影响。[结 论]1.非小细胞肺癌组织中CMTM6表达水平显着上调,CMTM6表达与肿瘤T分期、肿瘤组织学类型和肿瘤浸润淋巴细胞相关。2.CMTM6表达与肺癌预后呈负相关。3.干扰CMTM6抑制肺癌细胞的增殖、侵袭迁移能力。4.CMTM6促进肺癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,其调控机制可能与P53介导细胞周期阻滞有关。CMTM6通过MAPK/ERK信号通路介导肺癌细胞的增殖和迁移。5.CMTM6可作为评估NSCLC预后的独立危险因素,为临床制定个体化NSCLC治疗方案提供依据。
徐涵[2]（2020）在《长链非编码RNA MYU在肺腺癌中的功能及机制研究》文中研究说明目的:肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症,患者的5年生存率仅15%-20%,主要分为小细胞和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）。其中,肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）是NSCLC的一种主要亚型。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是一类长度超过200个核苷酸的功能性RNA分子的总称,它们不编码蛋白质,但能调控基因表达,进而影响多种肿瘤的发生及发展。lncRNA MYU（c-Myc-upregulated lncRNA）与结肠癌和前列腺癌发生发展有关,但其在NSCLC中的功能及作用机制仍不清楚。本论文旨在研究MYU在LUAD中的功能和可能的作用机制。方法:通过下载肿瘤基因图谱数据库（The Cancer Genome Atlas,TCGA）中的LUAD临床组织样本数据、采用实时荧光定量聚合酶链式反应,检测收集到的24例LUAD患者的肿瘤组织及20例癌旁非肿瘤组织,以及人LUAD细胞系与正常人支气管上皮细胞系中MYU的表达量,考察MYU的表达与LUAD的临床相关性。采用MTT法、克隆形成实验、BrdU掺入实验、划痕愈合实验和流式细胞术等,检测特异性敲减或过表达MYU对LUAD细胞增殖、迁移、细胞周期和凋亡等不同生物学过程的影响;进一步采用Western blot检测MYU对c-Myc及其下游关键效应蛋白的调节作用。最后,利用肺腺癌小鼠模型,研究敲减MYU对LUAD皮下移植瘤生长的影响。结果:分析TCGA数据库发现,MYU在LUAD肿瘤组织中的表达量显着高于癌旁非肿瘤组织;在收集到的LUAD组织中,与癌旁非肿瘤组织相比,MYU的RNA水平显着升高;与人正常支气管上皮细胞相比,MYU的RNA水平在PC9、A549、HCC827细胞中均显着升高。在MYU相对高表达的细胞系PC9和A549中,敲减MYU后显着抑制细胞的增殖及迁移能力,且引起细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡;在MYU相对低表达的细胞系H1650中,过表达MYU则显着促进细胞的增殖和迁移。敲减MYU后,考察c-Myc及其周期相关的下游效应分子的变化,发现p27蛋白表达显着上调,c-Myc及CDK6蛋白表达显着下调。体内实验结果表明,敲减MYU可有效抑制PC9细胞小鼠皮下移植瘤的生长。免疫组化结果显示,在肿瘤组织中,敲减MYU后p27蛋白水平上调,c-Myc及CDK6蛋白水平下调,与体外Western blot结果一致。结论:在TCGA数据库、收集到的LUAD临床样本中,MYU在肿瘤组织中的表达水平显着高于癌旁组织;在多个LUAD细胞系中,MYU的表达水平显着高于人正常支气管上皮细胞16HBE细胞。体外实验结果显示,敲减MYU可有效抑制LUAD细胞的增殖及迁移,诱导细胞周期阻滞并促进凋亡。该作用可能与c-Myc及其周期相关的下游效应分子CDK6和p27密切相关。体内实验结果表明,敲减MYU有效抑制了LUAD细胞在裸鼠体内肿瘤的生长。这些数据综合文献报道,提示MYU和c-Myc之间可能存在正向调节的环路,并由此引发这两个基因的高表达,进而加速LUAD的发生发展。因此,在LUAD患者中,敲减MYU有可能成为一种通过靶向c-Myc信号通路从而抑制肿瘤生长的治疗手段。
王琼梓[3]（2020）在《GRWD1通过激活Notch信号通路促进非小细胞肺癌增殖和迁移的研究》文中指出目的:肺癌是目前世界上最常见的人类恶性肿瘤,且其发病率和死亡率在所有恶性肿瘤疾病中排在首位,按病理类型分类的话约有80%为非小细胞肺癌（NSCLC）,该病往往在临床确诊时已处于癌症晚期,预后很差。NSCLC的最佳治疗方法目前是手术切除,但即使达到临床治愈的患者也可能会出现局部或全身复发,最终仍死于该疾病。因此,发现并明确在NSCLC的发生发展中起重要作用的分子并了解其作用机制是十分重要的。有效的识别NSCLC的生物标记物和药物靶标将有助于该疾病的早期诊断和进行有效的治疗,在对NSCLC的这场斗争中,分子研究在该疾病治疗所采取的措施中具有更优先的高度。Notch信号通路是常见的主要参与器官的发育,分化,细胞的增殖和凋亡等调控的信号通路。一些研究表明,它也参与了乳腺癌和T细胞白血病等恶性肿瘤疾病的调节。活化的Notch蛋白在肺泡上皮细胞中过表达,并与Myc途径协同作用,促进NSCLC的发展。Notch1可以通过调节p53的稳定性来抑制p53介导的凋亡,是肺腺癌生长所必需的。众所周知,Notch信号通路含有5个配体（DLL1、3和4,以及Jagged-1和jagged-2）,4个受体（Notch 1、2、3和4）,通过配体-受体结合激活后,Notch蛋白经过3次水解反应,其胞内结构段（NICD）被释放并转移至细胞核,在细胞核中诱导编码c-myc,p21,p27和HES家族蛋白的靶癌基因表达,从而促进癌变。GRWD1（富含谷氨酸的WD重复序列蛋白1）是一个编码了446个氨基酸的WD重复序列蛋白,其中包含了7个WD序列和一个位于N端的富含谷氨酸的酸性结构域。其中WD重复序列是个高度保守的结构域,其大小约含40–60个氨基酸,是蛋白质与蛋白质或者蛋白质和DNA相互作用的位点。WD重复序列蛋白在真核生物中高度保守,并且与各种生物学过程（包括细胞分裂,凋亡和信号转导）密切相关。目前GRWD1被报道在各种癌细胞系中过表达,可诱导人类正常细胞的致癌转化,并与癌症患者的预后不良相关。但是,GRWD1在非小细胞肺癌中的生物学功能目前仍不清楚。在这项研究中,我们旨在通过检查新鲜NSCLC组织和肺癌细胞系中的GRWD1 mRNA和蛋白表达来阐明GRWD1在该疾病中的作用。我们还在细胞水平上分析了GRWD1对NSCLC细胞增殖和迁移的影响,并探讨了其作用机理以明确其在NSCLC中的作用。研究方法:1.免疫组织化学:选取中国医科大学附属第一医院2015-2016年住院确诊为NSCLC的患者,用手术切除的肿瘤组织制成石蜡切片共170例用于免疫组织化学,所有病例的患者均没有经过临床放射疗法和化学疗法的治疗。免疫组织化学染色是采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法进行。最终的实验结果是经由两名经验丰富的临床工作者的检验,并通过评估每个样本中每个代表性区域中的染色强度和染色细胞数量的百分比,对所有样本进行了半定量计分评分,根据染色的强度,将GRWD1的表达情况分为4个等级:0分（无染色）,1分（弱染色）,2分（中等程度染色）和3分（强染色）,根据染色细胞数量所占的百分比数评分如下:0分（0%）,1分（1–30%）,2分（31–70%）和3分（71–100%）。将每个肿瘤样本的两个分数相乘,从而得到0到9之间的分数,最终,分数大于3的称为“GRWD1高表达”,而小于3的称为“GRWD1低表达”。最终的量化结果使用SPSS软件进行所有统计分析,卡方检验分析GRWD1的表达与临床相关病理因素之间的关系,计算所得的P值<0.05则被认定具有统计学意义。2.细胞培养:实验中使用的所有细胞系都是购买于中国上海细胞库,所有的细胞培养是在含有10%合格胎牛血清和100 IU/ml青霉素-链霉素的培养基中进行。人类支气管上皮样细胞（HBE）细胞系是在含有高葡萄糖的DMEM培养基中培养,肺癌A549,H1299,H460,H226,H226和H292细胞系是使用RPMI1640培养基培养,SK-MES-1肺鳞癌细胞系是使用MEM培养基培养。所有细胞系及细胞学实验均在含5%二氧化碳的培养箱37°C环境中培养。3.定量实时聚合酶链反应（PCR）:实验使用的是SYBR绿色混合染料快速PCR试剂盒,在QuantStudio 3实时PCR仪器中进行,并根据试剂说明书采取以下实验条件进行实时定量PCR检测:95°C 2分钟,95°C 15 s,在60°C下1分钟,持续40个循环。检测结果以β-ACTIN编码基因作为内源性参照物采用2-ΔΔCT方法来计算基因的相对表达量。所有实验结果均在相同条件下重复3次。4.细胞存活和生长实验:实验组和对照组细胞在转染后第24个小时,将细胞以约5000个细胞/孔的密度接种在含有10%胎牛血清培养基的96孔板中,每个样品准备5个重复孔。连续培养细胞5天,并在每天的同一时间用MTT试剂染色。简言之,向每个细胞培养孔中加入l5mg/ml MTT试剂10μl,将细胞在37℃,5%二氧化碳浓度下孵育4小时,小心地除去每个孔中的培养基,并添加150μl的DMSO闭光溶解约10分钟,然后使用酶标仪在570 nm波长下用分光光度法对结果进行定量分析。5.细胞克隆形成实验:将实验组和对照组转染24小时后的细胞用胰蛋白酶消化,计数细胞,并在含有培养基的6孔板中以500个细胞/孔的密度培养大约8-10天,直到形成肉眼可见的克隆集落,用预冷的甲醇固定菌落后用苏木素染色,风干后根据计数菌落的数量进行量化分析。6.细胞周期测定:实验组和对照组转染48小时后的细胞,通过胰蛋白酶消化后,低温低速离心从6孔板中收获细胞,在PBS中洗涤,并用70%乙醇在4°C下固定过夜。然后通过离心收集细胞,再次在PBS中洗涤,并与450μl碘化丙啶（PI）和50μl RNaseA一起孵育30分钟后进行流式细胞术检测细胞周期。7.Transwell迁移实验:细胞迁移测定是在孔径为8微米的24孔Transwell小室中进行的。实验组和对照组细胞在转染24小时后,用胰蛋白酶消化并计数细胞,将含有10%胎牛血清的培养基600μl添加到下室,含有2%胎牛血清的培养基200μl添加到上室,将6×104个细胞接种在transwell小室的上室,培养24小时后,用棉尖擦除上室膜表面的细胞,用4%多聚甲醛固定,并用苏木素染色。在高倍显微镜下随机选择十个区域以计算迁移细胞的数量。实验在相同条件下重复进行3次。8.数据分析及统计学分析:我们从TCGA下载了NSCLC的转录组数据集,使用R3.5.0软件进行R语言分析找到DEGs,并利用R语言做基因间的相关性分析。预后分析使用Kaplan-Meier数据库,通过log-rank检验来比较生存曲线。使用ONCOMINE数据库中的基因表达阵列数据集分析临床患者标本中GRWD1的mRNA表达,并与正常组进行对比分析,P值和log2FC值分别定义为0.01和1.5。研究成果:1.UALCAN和GEPIA数据库中的数据集显示无论在LUAD还是LUSC中,GRWD1在癌症组织中的表达均高于正常组织;实时定量PCR结果表明癌症组织中GRWD1 mRNA的水平显着更高;GEPIA和Kaplan–Meier数据库分析表明,GRWD1 mRNA水平升高与总体生存率呈现显着负相关。免疫组织化学实验结果显示GRWD1的表达与NSCLC的细胞分化程度呈负相关,与肿瘤大小,淋巴结的转移和P-TNM分期呈正相关;蛋白质免疫印迹实验分析表明,癌组织中GRWD1表达高于对应癌旁组织。2.在A549和H1299两种细胞系中,细胞存活和生长实验,细胞克隆形成实验和Transwell迁移实验表明GRWD1可以促进NSCLC细胞的增殖和迁移的能力,细胞周期测定显示GRWD1主要影响细胞周期的G2/M期。3.蛋白质免疫印迹实验结果显示在NSCLC中,GRWD1可以通过CDK1,CyclinB1,P27影响细胞的增殖,通过CDC42,RhoA和RhoC影响细胞的迁移。4.蛋白质免疫印迹实验结果显示GRWD1过表达可以上调N-Cadherin,Vimentin,Snail和Zeb1的表达,下调E-Cadherin和ZO-1的表达来促进上皮间质转化进程。5.R语言分析NSCLC的差异表达基因及筛选与GRWD1有关的信号通路,发现Notch通路相关基因与其具有相关性。蛋白质免疫印迹实验验证GRWD1可以激活Notch信号通路。6.通过Notch通路抑制剂DAPT抑制Notch通路活性后,蛋白质免疫印迹,细胞克隆形成及Transwell迁移实验验证GRWD1是通过Notch通路促进NSCLC细胞的增殖和迁移。结论:1.GRWD1在NSCLC组织中过表达,其蛋白质表达水平与肿瘤大小,淋巴结转移和P-TNM分期呈正相关,而与肿瘤分化程度和患者生存时间呈负相关。2.GRWD1通过调节细胞周期蛋白CyclinB1-CDK1轴,影响细胞周期的G2/M期,从而促进NSCLC细胞增殖。3.GRWD1通过CDC42,RhoA和RhoC促进NSCLC细胞迁移。4.GRWD1可以激活Notch信号通路并通过该途径促进NSCLC细胞的增殖和迁移。
沈文明[4]（2019）在《去泛素化酶USP49在非小细胞肺癌中的功能及其机制的研究》文中研究表明第一部分USP49在非小细胞肺癌中的表达研究目的:去泛素化酶与肿瘤的发生发展密切相关,并且研究认为,靶向去泛素化酶开发相应抗肿瘤靶向药物已成为一种有效的策略。我们前期通过公共癌症数据库GEPIA分析发现,去泛素化酶USP49在非小细胞肺癌（NSCLC）中低表达,但其功能及其分子机制目前尚无文献报道。因此,本部分基于前期发现,将分析去泛素化酶USP49在NSCLC肿瘤组织及细胞系中的表达情况,并考察其表达高低与NSCLC病人预后的关系,从而更好地了解去泛素化酶USP49在NSCLC中的相关功能及作用机制,为临床上开发以USP49为靶点的靶向药物奠定一定的理论基础。方法:（1）运用GEPIA大数据库对USP49进行分析,分析对象为肺腺癌（LUAD）和肺鳞状细胞癌（LUSC）,分析结果为对比正常组织中的USP49的表达情况;（2）通过qRT-PCR的方法检测了 20例NSCLC病人样本中肿瘤组织以及癌旁组织中USP49的mRNA表达水平;（3）利用蛋白免疫印迹技术检测了 4株NSCLC细胞以及1株人支气管上皮样细胞中USP49的表达水平;（4）运用Kaplan-Meierplotter分析了肺癌患者表达不同水平USP49后,对其生存率的影响情况。结果:（1）从GEPIA数据库中分析可以看到,USP49在肺腺癌和肺鳞状细胞癌病人中的表达水平要明显低于正常组织中的表达水平;（2）采用qRT-PCR对20例NSCLC病人中肿瘤组织和癌旁组织中USP49的mRNA表达水平进行了分析,发现与癌旁组织比,USP49在NSCLC肿瘤组织中显着性低表达;（3）采用qRT-PCR以及蛋白免疫印迹法对细胞系中USP49的表达进行分析,发现相比较正常支气管上皮样细胞,USP49的mRNA及蛋白水平在NSCLC细胞系中都显着性低表达;（4）从Kaplan-Meier plotter分析的数据显示,肺癌中USP49的高表达可以明显延长病人的总生存率。结论:USP49在NSCLC中低表达,无论是通过对肿瘤数据库GEPIA、Kaplan-Meier plotter的分析,还是对病人原代组织、不同的NSCLC细胞系中USP49的检测,都可以得到证实。以上这些数据表明,USP49可能与NSCLC的发生发展密切相关。另外,Kaplan-Meier plotter分析发现,高表达USP49的肺癌患者,其整体存活率显着高于低表达的患者,这提示USP49还可以作为临床肺癌病人预后的一个重要评价指标。第二部分USP49通过阻断细胞周期抑制非小细胞肺癌的生长目的:既然USP49在肺癌中尤其是非小细胞肺癌（NSCLC）中低表达,为了进一步了解去泛素化酶USP49在NSCLC中的功能及其分子机制,本部分通过利用慢病毒过表达系统分析了过表达USP49在NSCLC中的作用,从而阐述去泛素化酶USP49在肺癌中的相关功能及其作用机制。方法:（1）利用慢病毒过表达系统在NSCLC细胞中过表达USP49基因;（2）利用CCK-8检测过表达USP49对NSCLC细胞生长的影响;（3）利用蛋白免疫印迹法检测过表达USP49对细胞周期相关蛋白的影响;（4）利用流式细胞技术检测过表达USP49对NSCLC细胞周期的影响。结果:（1）过表达USP49能够明显抑制NSCLC细胞的生长;（2）通过蛋白免疫印迹法检测发现,在NSCLC细胞中过表达USP49可以明显抑制细胞周期蛋白CyclinD1的表达以及诱导p53蛋白的表达;（3）利用流式细胞技术进一步分析发现,在NSCLC细胞中过表达USP49能够有效阻止细胞周期从G0期向G1期的转化。结论:在NSCLC细胞中,过表达USP49可以明显抑制细胞的生长。进一步通过流式细胞技术分析发现,过表达USP49能够有效抑制细胞周期从GO期向G1期的转化,从而抑制NSCLC细胞生长。接着,对其下游信号通路蛋白检测发现,USP49的过表达能够显着抑制细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,以及上调抑癌蛋白p53的表达。第三部分USP49调控非小细胞肺癌中PI3K/AKT信号通路目的:PI3K信号通路与肿瘤细胞的生长、增殖、迁移都密切相关。我们前期研究发现,USP49能够影响非小细胞肺癌（NSCLC）中PI3K信号通路。为了进一步验证这一现象,以及为了研究去泛素化酶USP49在NSCLC中的具体作用机制,本部分通过过表达和沉默USP49来检测对PI3K信号通路一系列相关蛋白的表达水平的影响,从而更加明确地阐述去泛素化酶USP49在NSCLC中的作用机制。方法:（1）通过蛋白免疫印迹法检测NSCLC中过表达USP49对PI3K信号通路中的调节亚基p85的磷酸化的影响;（2）通过蛋白免疫印迹法检测NSCLC中过表达USP49对PI3K信号通路中AKT蛋白的磷酸化,以及PI3K信号通路下游蛋白mTOR的磷酸化水平的影响;（3）利用shRNA干扰技术检测沉默USP49对PI3K p85磷酸化的影响;（4）利用shRNA干扰技术检测沉默USP49对AKT以及mTOR的磷酸化水平的影响。结果:（1）在NSCLC中过表达USP49,可以明显抑制PI3K的调节亚基p85的磷酸化水平;（2）在NSCLC中过表达USP49,明显抑制了 PI3K信号通路中AKT蛋白的磷酸化,以及PI3K信号通路下游蛋白mTOR的磷酸化;（3）利用shRNA沉默USP49能够上调PI3K p85的磷酸化水平;（4）利用shRNA沉默USP49同时也上调AKT蛋白的磷酸化,以及上调mTOR的磷酸化水平。结论:在NSCLC细胞中,过表达USP49能够显着抑制PI3K p85、AKT和mTOR的磷酸化水平,而沉默USP49后,能够显着上调PI3K p85、AKT和mTOR的磷酸化。这些提示,去泛素化酶USP49可以通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路来影响NSCLC的生长。第四部分USP49通过抑制PTEN蛋白的多聚泛素化来稳定PTEN目的:在PI3K/AKT信号通路中,PTEN是其主要的负调控因子。而上一部分研究发现,过表达USP49能够有效抑制PI3K/AKT信号通路。因此,本部分将探索USP49是否通过影响PTEN的表达来影响PI3K/AKT信号通路。并将进一步探索USP49作为去泛素化酶,是否可以直接影响PTEN的泛素化水平,从而更深一步地阐述USP49在NSCLC中的作用机制。方法:（1）运用GEPIA大数据库对USP49和PTEN的表达情况进行相关性分析;（2）通过蛋白免疫共沉淀分析USP49能否影响USP49的多聚泛素化;（3）通过质粒过表达及shRNA法研究过表达或干扰USP49是否影响PTEN的表达水平;（4）CHX chase实验考察USP49对PTEN蛋白半衰期的影响。结果:（1）GEPIA数据库分析发现,USP49和PTEN的表达存在一定的相关性;（2）通过蛋白免疫共沉淀实验发现,USP49能够显着降低PTEN蛋白的多聚泛素化;（3）通过质粒过表达及shRNA沉默USP49发现,过表达或沉默USP49能够影响PTEN的蛋白表达,而对其mRNA水平并无显着影响;（4）通过CHX chase实验发现,USP49能够延长PTEN蛋白的半衰期。小结:在NSCLC中,USP49可以直接通过调控PTEN蛋白的去泛素化来稳定PTEN蛋白的表达水平,这一机制可以丰富去泛素化酶USP49在NSCLC中的泛素化机制。
胡晓晖[5]（2019）在《miR-221在骨肉瘤细胞中的作用及机制研究》文中认为第一部分miR-221在骨肉瘤细胞中的表达情况目的:1.研究不同骨肉瘤细胞系中miR-221相对于人成骨细胞（对照）的表达水平,观察是否有一致性的上调或下降。2.从多种骨肉瘤细胞系中筛选出合适的细胞系进一步实验研究。方法:1.对人骨肉瘤HOS,SaOS2,MG63,U-20S细胞,人类成骨细胞系（hFOB1.19）进行细胞培养。2.通过qRT-PCR测定各骨肉瘤细胞系和人类成骨细胞系miR-221的表达水平。结果:1.人类成骨细胞系（hFOB1.19）miR-221表达的相对值:0.031759±0.004444;HOS 细胞 miR-221 表达的相对值:0.037717±0.003754;SaOS2 细胞 miR-221 表达的相对值:0.056151±0.003706;MG63 细胞 miR-221 表达的相对值:0.104026+0.013724;U-20S细胞miR-221表达的相对值:0.144812±0.010018。各组骨肉瘤细胞miR-221表达的相对值与对照组比较均有统计学差异（P<0.05）。2.MG63,U-20S细胞的miR-221表达的相对值与对照组比较均有显着的统计学差异（P<0.01）,MG63和U-20S细胞miR-221的表达水平升高特别明显。结论:不同骨肉瘤细胞系的miR-221表达水平相较于人类成骨细胞系显着升高。MG63和U-20S细胞的miR-221表达水平升高特别明显,筛选出进行下一步实验。第二部分miR-221抑制剂对骨肉瘤细胞系的生物学行为的影响目的:研究miR-221抑制剂对骨肉瘤细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,为进一步的机制研究提供依据。方法:1.通过qRT-PCR法检测miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染的MG63和U-20S细胞中miR-221的表达水平。2.MTT实验检测miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染的MG63和U-20S细胞在0,24,48和72小时的增殖情况。3.流式细胞仪检测分析miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染成功后MG63和U-20S细胞的周期和凋亡情况。4.通过transwell小室实验检测miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染成功后MG63和U-20S细胞的迁移、侵袭能力。结果:1.miR-221抑制剂显着下调MG63和U-20S细胞的miR-221表达水平（P<0.01）。miR-221表达的下降证明了细胞转染miR-221抑制剂的成功。2.与NC抑制剂转染相比较,miR-221抑制剂转染的MG63和U-20S细胞的增殖在24（P<0.01）,48（P<0.01）和72（P<0.01）小时3个时间点是显着下降的。3.miR-221抑制剂转染的MG63和U-20S细胞的G0-G1期细胞百分比和细胞凋亡率都是显着增加的（p<0.01）。4.miR-221抑制剂转染的MG63和U-20S细胞发生迁移和侵袭的数量显着下降（P<0.01）。结论:miR-221表达水平的下调能够显着抑制MG63和U-20S细胞的增殖,促进MG63和U-20S细胞的凋亡以及细胞周期停滞,能显着抑制MG63和U-20S细胞的迁移和侵袭能力。第三部分 miR-221在骨肉瘤细胞中作用的机制研究目的:1.寻找miR-221的靶基因。2.通过改变靶基因表达,研究对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。3.找出miR-221在骨肉瘤细胞中的作用机制。方法:1.靶区扫描分析寻找miR-221的靶基因。2.将 pGL3-CDNK1B-3’-UTR（野生型或突变质粒）与 pRL-SV40 和 miR-NC（对照）或miR-221模拟物共转染到MG63和U-20S细胞中,检测相对荧光素酶活性。3.通过 qRT-PCR,Western blot 检测 miR-NC 或 miR-221 模拟物转染 MG63 和U-20S细胞后的CDKN1B/p27表达水平。4.下调CDKN1B表达水平,检测其对U-20S细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。5.Western blot 检测 p27,Cyclin E,Cyclin D1,Bax,Bcl-2,Caspase-3,Snail和Twist1的蛋白质表达。结果:1.CDKN1B/p27 是 miR-221 的结合靶标。2.miR-221模拟物转染组的相对荧光素酶活性显着降低（P<0.01）。荧光素酶活性测定显示miR-221的过表达通过结合后者3’-UTR位点抑制了 CDKN1B/p27的转录。3.转染miR-221模拟物后,CDKN1B mRNA在MG63和U-20S细胞的表达水平显着下调（P<0.01）,p27蛋白水平显着降低（P<0.05）。4.miR-221抑制剂+siCDKN1B转染显着增加U-20S细胞增殖能力（P<0.01）,显着抑制G0/G1停滞（P<0.01）,显着降低细胞凋亡率（P<0.01）,细胞发生迁移、侵袭的数量显着上升（p<0.01）。5.miR-221抑制剂显着增加U-20S细胞中Bax和Caspase-3的蛋白表达水平（P<0.01）,降低 Cyclin E,Cyclin D1,Bcl-2,Snail 和 Twist1 的蛋白表达水平（P<0.01）。然而,当U-20S细胞中CDKN1B的水平下调后,显着逆转了 miR-221抑制剂诱导的这些蛋白质表达（P<0.01）。结论:miR-221通过靶向作用于CDKN1B/p27调节骨肉瘤细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭,miR-221/CDKN1B/p27在骨肉瘤中起功能性作用,骨肉瘤细胞中miR-221下调的作用特别依赖于CDKN1B的增加。
王海英[6]（2019）在《Kpnβ1在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究》文中提出第一部分 Kpnβ1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义目的:研究Kpnβ1在非小细胞肺癌中的表达及与预后的关系,探索Kpnβ1作为潜在靶点在非小细胞肺癌检测中应用的可能性。方法:收集154例组织标本,其中包括8例新鲜NSCLC患者的癌组织及癌旁组织和146例NSCLC蜡块组织及相对应癌旁组织。运用Western Blot方法检测新鲜NSCLC及癌旁组织中Kpnβ1及PCNA蛋白的表达。将146蜡块组织及相对应的癌旁组织进行免疫组化染色,检测石蜡组织切片中Kpnβ1蛋白的表达情况,并统计学分析Kpnβ1的表达与146例NSCLC患者临床病理参数之间的关系,分别使用COX多因素分析及Kaplan-Meier生存曲线分析Kpnβ1蛋白的表达与患者预后之间的关系。结果:（1）Kpnβ31蛋白在新鲜NSCLC组织中的表达较癌旁组织明显增高,差异有统计学意义（P<0.05）;同时Western Blot结果还提示新鲜NSCLC中PCNA蛋白的表达较癌旁组织中也明显增高,与Kpnβ1蛋白表达趋势一致。（2）免疫组化结果显示:Kpnβ1及Ki-67蛋白主要表达于细胞核,阳性表达呈黄色或者棕黄色。Kpnβ1及Ki-67在NSCLC组织中的阳性表达均明显高于正常肺组织,且与NSCLC的分化程度有关,分化程度越低标本中Kpnβ1及Ki-67蛋白的表达较多。（3）统计学分析结果显示:Kpnβ1高表达与患者年龄（p=0.038<0.05）、临床分期（p<0.001）、组织分化程度（p=0.017<0.05）、肿瘤大小（p=0.028<0.05）、淋巴结是否转移（p<0.001）,以及Ki-67的表达高低（p=0.013<0.05）相关,差异有统计学意义。而与患者的性别、组织学分型与吸烟状况无明显关系（P>0.05）。在多因素分析中,Kpnβ1 蛋白的高表达（HR,1.911,95%CI.1.015-3.598;P=0.045）和组织分化程度（HR,3.226,95%CI,2.026-5.136;P<0.001）是影响 NSCLC 预后的独立因素,Kaplan-Meier生存曲线提示Kpnβ1高表达组较Kpnβ1低表达组生存率差,差异有统计学意义（P<0.001）。结论:Kpnβ1蛋白在NSCLC组织中呈高表达,并与患者年龄、临床分期、组织分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移、以及Ki-67的表达密切相关;Kpnβ1高表达较低表达的患者预后差,是影响NSCLC预后的独立因素。第二部分 Kpnβ1通过PI3K/AKT通路对非小细胞肺癌增殖能力的影响目的:通过运用分子生物学方法检测沉默Kpnβ1基因后肺癌细胞增殖能力和对顺铂敏感性的变化情况,及对PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。探讨Kpnβ1通过PI3K/AKT信号通路影响NSCLC生物学特性的可能机制。方法:Western blot方法检测Kpnβ1蛋白在NSCLC细胞株（A549,H1299与SPCA-1）中的表达,Kpnβ1蛋白在A549细胞株表达最高,然后用流式细胞仪检测细胞的周期变化;同时,使用Western Blot方法检测Kpnβ1、PCNA和Cyclin D1蛋白在细胞不同周期时相的表达情况。用Kpnβ1的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）敲低A549细胞内的Kpnβ1表达,随后用CCK-8、平板克隆形成试验与5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷试剂盒（5’ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU）检测下调Kpnβ1基因后A549细胞增殖能力的改变;流式细胞仪检测下调Kpnβ1基因对A549细胞周期进程的影响。此外,本研究通过CCK-8方法检测了 Kpnβ1基因沉默后A549细胞对CDDP敏感性的改变。并通过Western Blot方法进一步验证Kpnβ1沉默及顺铂处理后Kpnβ1蛋白、PI3K,p-AKT（Ser473）和p-AKT（Thr308）蛋白的表达以及细胞凋亡指标cleaved-parp表达情况。结果:（1）Kpnβ1蛋白在A549、H1299及SPCA-1中均有表达,而在A549中的表达高于另外两株细胞系,因此,我们选取A549细胞用于后续实验。（2）对A549细胞进行流式细胞仪检测发现,A549细胞在血清饥饿培养时,细胞增殖能力明显受到抑制,细胞周期被阻滞在G0/G1期;恢复血清供应培养后,细胞增殖能力恢复,由G0/G1期进入S期,G0/G1期比例由72.32%下降至35.08%,S期细胞由22.55%增加至56.62%;同时,血清饥饿后,Kpnβ1表达水平明显降低,恢复血清供应培养后,Kpnβ1的表达随细胞增殖力升高也逐渐升高,在48h达到高峰;Kpnβ1的表达与Cyclin D1及PCNA的趋势一致;而干扰Kpnβ1基因后,Cyclin A2、Cyclin D1以及PCNA的表达较对照组则明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）CCK8方法、平板克隆实验及EdU试剂盒检测均发现Kpnβ1表达下调后,与对照组相比,干扰组细胞增殖能力明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）流式细胞检测发现Kpnβ1基因沉默后A549细胞G0/G1期细胞增加（从65.31%至77.77%）,S期细胞减少（从25.99%至17.94%）,差异有统计学意义（P<0.05）。（5）顺铂敏感性检测结果发现,经不同浓度顺铂处理后,Kpnβ1基因干扰组和对照组细胞增殖力均有下降,以Kpnβ1干扰组下降最明显,且与CDDP剂量呈正相关,在CDDP20 μmol/L浓度时最明显,差异有统计学意义（P<0.05）。（6）Kpnβ1沉默后 PI3K/AKT通路相关蛋白 PI3K,p-AKT（Ser473）,p-AKT（Thr308）和PCNA的表达水平较对照组均明显降低。（7）为进一步探讨Kpnβ1基因与顺铂的协调作用,用Western Blot检测用Kpnβ1干扰与顺铂处理后,PI3K,p-AKT（Ser473）and p-AKT（Thr308）蛋白的表达变化,结果显示:Kpnβ1基因沉默组、顺铂处理组及Kpnβ1基因沉默联合顺铂处理组的PI3K,p-AKT（Ser473）和p-AKT（Thr308）蛋白表达与对照组相比均明显降低,其中以Kpnβ1-shRNA联合CDDP处理组各蛋白表达降低最明显。此外,与对照组相比其他三组细胞凋亡指标cleaved-parp表达均增高,以两者联合组cleaved-parp表达增高最明显。结论:沉默Kpnβ1基因能够抑制NSCLC细胞增殖,增加NSCLC细胞对CDDP的敏感性;Kpnβ1可能通过调控PI3K/AKT信号通路发挥其作用。本研究探讨了 Kpnβ1在非小细胞肺癌中的表达及其可能的作用机制,为进一步应用于临床提供实验室基础及理论依据。
刘雪青[7]（2018）在《胆汁酸膜受体TGR5在非小细胞肺癌发病中的作用和临床意义》文中研究表明研究目的探讨胆汁酸膜受体（G Protein-Coupled Bile Acid Receptor 1,GPBAR1,TGR5）在非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达、作用机制及其临床意义。研究方法1.利用免疫组化法检测160例NSCLC及相应癌旁肺组织中TGR5的表达,分析TGR5表达与NSCLC患者临床病理特征及预后的关系。2.采用基因干扰或过表达等手段,从体内、体外多个层面,考察TGR5对NSCLC细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭以及肿瘤生长的影响,利用Western blot技术检测TGR5对细胞周期蛋白、运动分子及基质降解酶的作用,明确TGR5调控NSCLC增殖和转移的分子机制。3.探讨TGR5对Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3（Janus kinase2/Signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3）信号通路的影响;采用荧光素酶（Luciferase）报告基因实验检测TGR5对STAT3的转录调控作用;考察JAK2/STAT3通路对TGR5诱导的NSCLC细胞增殖、运动及肿瘤生长的影响,探讨JAK2抑制剂在TGR5高表达肿瘤中的应用。利用免疫组化法检测同一NSCLC组织中磷酸化STAT3(p-STAT3Tyr705)的表达情况,分析TGR5与p-STAT3Tyr705表达的相关性,并进行预后生存分析。4.采用ELISA法检测NSCLC患者及健康人中的血清胆汁酸水平,分析NSCLC中胆汁酸水平与TGR5表达的相关性,并进一步通过体外实验明确胆汁酸对NSCLC细胞相关表型的影响。研究结果1.免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,TGR5在NSCLC癌组织中表达显着升高（P<0.001）。TGR5高表达者临床分期较晚,肿瘤直径较大（P<0.05）。TGR5高表达是NSCLC患者预后不良的独立预测指标（Hazard ratio[HR]=1.967,95%CI=1.203-3.214;P=0.007）。2.TGR5可通过上调细胞周期蛋白分子的表达如cyclin D1,cyclin E1,p-Rb,c-Myc,CDK4/6等,促进NSCLC细胞增殖;敲低TGR5引起NSCLC细胞G1期阻滞,而不影响细胞凋亡。体内实验进一步证实TGR5促进裸小鼠移植瘤生长。此外,TGR5可通过调控基质降解酶MMP2、MMP9、RhoA和ROCK1的表达而促进NSCLC细胞迁移和侵袭能力。3.Western blot结果显示TGR5促进JAK2和STAT3的磷酸化水平,并可上调STAT3的转录活性。此外,JAK2/STAT3通路的活化介导了TGR5高表达促进的NSCLC细胞增殖、运动,且JAK2抑制剂明显逆转TGR5高表达诱导的肿瘤体内生长。在NSCLC组织样本中,TGR5与p-STAT3Tyr705表达呈明显正相关,两者同时高表达的NSCLC患者预后最差。4.NSCLC患者血清中的胆汁酸水平如DCA,CDCA和UDCA明显比健康人高;且胆汁酸水平与TGR5表达呈正相关。体外实验显示DCA可通过活化TGR5促进NSCLC细胞运动。研究结论1.本研究首次发现TGR5在NSCLC患者癌组织中表达升高,TGR5高表达是NSCLC患者预后不良的独立预测指标;2.TGR5通过活化JAK2/STAT3信号通路促进NSCLC细胞体外增殖、运动和体内肿瘤生长;3.NSCLC患者血清中胆汁酸水平较高,且与TGR5表达呈正相关;胆汁酸通过活化TGR5促进NSCLC细胞迁移和侵袭。本研究首次在国内外揭示了TGR5在NSCLC发生发展中的生物学作用,因此,TGR5有望成为判断NSCLC预后和治疗的新靶标。
梁志刚[8]（2017）在《PRC1对非小细胞肺癌细胞增殖和周期的影响及潜在机制的研究》文中认为目的:细胞质分裂调控蛋白1（Protein regulator of cytokinesis1,PRC1）定位在15号染色体（15q26.1）,PRC1蛋白是由620个氨基酸组成,主要是在细胞周期的S期及G2/M期表达,最初是在体外寻找细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinases,CDK）的作用底物时被发现,是细胞周期蛋白依赖性激酶的基质,主要参与纺锤体平行微丝及缩复环的形成,与细胞的运动和有丝分裂密切相关。通过基因表达谱数据分析,人类胆管癌、结肠癌、非小细胞肺癌、胰腺癌和乳腺癌等多种癌症均发现PRC1表达上调,目前的研究也已表明,PRC1在宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、肝癌及乳腺癌等多种恶性肿瘤中都有重要的功能。尽管曾有研究报道了非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）经化学治疗后其PRC1表达会下调,提示PRC1与非小细胞肺癌的不良预后可能相关,但对于PRC1在非小细胞肺癌发生发展过程中的具体功能以及PRC1的表达水平与非小细胞肺癌患者生存预后的具体关系目前均仍缺乏认识,有待进一步研究。方法:分析来源于GEO数据库的三组非小细胞肺癌患者的基因表达谱数据（GSE42127,GSE11969,GSE8894）,发现一组与非小细胞肺癌恶性表型及预后相关的网络核心分子,再通过分析来源于癌症与肿瘤基因数据库（TCGA数据库）非小细胞肺癌组织及癌旁组织中关键基因PRC1表达情况,并利用实时定量荧光PCR检测等方法检测PRC1在36例非小细胞肺癌患者癌组织、配对癌旁组织样本中的表达情况,来证实PRC1与非小细胞肺癌的相关性,显示PRC1在NSCLC组织中呈现过表达,可能是NSCLC潜在的促癌基因;分别将针对PRC1 mRNA的特异性siRNA和PRC1高表达质粒载体转染至NSCLC细胞内,并经q-PCR和Western blot方法检测不同组NSCLC细胞转染后的PRC1的mRNA水平和蛋白表达水平,验证转染效果;再以PRC1高表达及沉默表达NSCLC细胞分别通过软琼脂集落实验、流式细胞技术及Transwell细胞迁移实验等分析PRC1在体外对非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期及细胞迁移的影响;此后,我们又进行了裸鼠成瘤实验,检测了PRC1在体内对NSCLC细胞在裸鼠皮下移植瘤生长的影响;随后,为了进一步明确PRC1在非小细胞肺癌中的功能,经相关医学伦理委员会同意后,我们对150例经手术确诊、有完整随访资料的非小细胞肺癌患者的癌组织进行了免疫组化检测,按染色强度及阳性染色细胞百分比进行评分,并对150例患者按不同TNM病理分期进行分组,应用IPP6.0（Image-Pro Plus 6.0）软件分析不同组非小细胞肺癌患者的免疫组化染色平均光密度值（MOD）,分析PRC1表达水平与TNM病理特征及分期的关系,并绘制该150例患者的Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank方法比较生存率,分析PRC1表达水平与非小细胞肺癌患者生存预后的关系。结果:在本部分实验研究中,我们首先通过基因表达谱数据分析及样本检测等方法,发现PRC1在非小细胞肺癌（NSCLC）癌组织中呈现高表达的趋势,提示其可能是NSCLC的促癌基因。在体外细胞实验中,发现PRC1表达上调可促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移,并促进非小细胞肺癌细胞周期进入分裂期;通过动物实验发现PRC1表达上调可促进裸鼠非小细胞肺癌移植瘤的生长,而临床资料的分析同样发现,PRC1高表达的非小细胞肺癌患者较PRC1低表达患者病理分期及生存预后相对差。结论:本部分课题研究工作揭示了PRC1在非小细胞肺癌发生、发展中的部分功能及其与非小细胞肺癌患者TNM病理分期、生存预后的关系,明确了PRC1在非小细胞肺癌中呈现为促癌作用,提示PRC1可能成为非小细胞肺癌的一个潜在治疗靶点和预测因子。目的:通过第一部分的实验研究的结果,发现PRC1高表达在体外可促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移,促进NSCLC细胞周期进入分裂期,同时在动物模型中发现PRC1促进非小细胞肺癌移植瘤的生长;在临床上,PRC1高表达的非小细胞肺癌患者较PRC1低表达患者的病理分期及生存预后相对差。这些研究结果,揭示了PRC1在非小细胞肺癌的发生发展中可能发挥着重要的促癌作用,但PRC1如何影响非小细胞肺癌（NSCLC）细胞周期及增殖的分子机制仍尚不清楚,有待进一步研究与探讨。方法:通过Western blot方法对增殖相关的调控通路分子及下游靶分子表达及磷酸化情况进行了检测,探索PRC1促进NSCLC细胞增殖的潜在机制;通过免疫荧光实验检测细胞周期相关调控蛋白,揭示PRC1如何影响非小细胞肺癌的细胞分裂,并进一步通过q-PCR对NSCLC细胞周期相关分子进行检测,发现影响细胞周期的可能相关信号通路,通过Western blot检测不同PRC1表达水平的非小细胞肺癌细胞该信号通路分子及下游信号分子表达、磷酸化情况,探索PRC1影响NSCLC细胞周期的潜在机制。结果:在分子机制研究中,我们发现PRC1高表达组NSCLC细胞的FAK磷酸化水平上调,而加入si RNA-FAK之后,发现PRC1对细胞增殖的促进作用被抑制;进一步检测了FAK的下游靶分子Paxillin的表达及磷酸化水平,结果表明PRC1高表达同样也促进了Paxillin磷酸化水平,提示PRC1可能是通过调控FAK-Paxillin通路分子的磷酸化水平来促进NSCLC细胞的增殖;在影响细胞周期的分子机制研究中,发现PRC1通过调控F-actin蛋白的表达来促进非小细胞肺癌细胞进入分裂期;PRC1高表达明显抑制细胞周期相关分子Cip1/p21和Kip1/p27的表达,同时发现Cip1/p21和Kip1/p27下游分子p107和p130的磷酸化被抑制,而p RB的磷酸化不受影响,提示PRC1可能是通过调控p21/p27-p RB家族分子磷酸化水平来实现对非小细胞肺癌细胞周期的调控。结论:通过本部分实验研究,初步揭示了PRC1影响非小细胞肺癌（NSCLC）细胞周期及增殖的可能相关分子机制,为寻找非小细胞肺癌新的治疗靶点及靶向药物治疗的研究奠定了一定的实验理论基础。
游文杰[9]（2017）在《FXR在非小细胞肺癌发病中的作用和临床意义》文中认为研究目的探索胆汁酸核受体（Farnesoid X receptor,FXR）在非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达情况及促癌作用机制;研究FXR对肿瘤细胞表达PD-L1的调控及潜在联合用药前景。研究方法1.免疫组化法在NSCLC组织中检测FXR的表达情况,并分析与患者总生存期和临床病理特征的关系。2.采用FXR抑制剂Z-guggulsterone或特异性si RNA抑制蛋白表达,构建稳定干扰或高表达FXR的NSCLC细胞株。观察FXR对肿瘤细胞增殖、细胞周期、凋亡、以及裸鼠皮下移植瘤生长的影响;利用Western blot研究FXR对细胞周期蛋白的影响。采用FXR靶基因小异二聚体蛋白（Small heterodimer partner,SHP）特异性si RNA抑制蛋白表达,探索SHP是否参与FXR对肿瘤细胞增殖和周期蛋白的调控。3.染色质免疫沉淀（Chromatin immunoprecipitation,Ch IP）技术和荧光素酶生物发光法检测FXR与cyclin D1启动子的结合效应和激活效应。通过补救实验研究cyclin D1与FXR在NSCLC细胞中功能的关联。免疫组化法在相同NSCLC样本中检测cyclin D1的表达情况,并分析与FXR表达的相关性。4.检测FXR对NSCLC细胞表达PD-L1的影响,在相同NSCLC样本中检测PD-L1与FXR表达的相关性。在小鼠肺癌、结肠癌、黑色素瘤等肿瘤细胞中检测mus FXR的表达,并探究其对肿瘤细胞表达mus PD-L1的影响。利用SHP特异性si RNA抑制蛋白表达,探索SHP是否参与FXR调节肿瘤细胞表达PD-L1;利用Ch IP技术检测FXR与PD-L1启动子的结合效应;检测FXR对磷酸化EGFR的影响,并采用相应抑制剂处理,探索FXR是否通过磷酸化EGFR调控PD-L1的表达。研究结果1.共160例NSCLC患者纳入研究。免疫组化评分显示,FXR在肿瘤组织中表达量显着高于癌旁肺组织（P<0.001）。FXR蛋白表达量与患者TNM分期和肿瘤最大径显着相关（均P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析提示,FXR高表达组总生存期显着低于FXR低表达组（P=0.0032）。Cox多因素比例风险模型评估显示,FXR对患者总生存期具有较好的独立预测价值（Hazard ratio[HR]1.71,95%CI 1.108-2.637;P=0.015）。2.NSCLC细胞H1975和H1299表达FXR较高,而HCC4006表达FXR较低。抑制FXR可显着抑制H1975和H1299细胞增殖,并且降低增殖标志物Ki-67的表达;相反,过表达FXR则促进HCC4006细胞增殖和Ki-67的表达。动物实验发现,抑制FXR可显着抑制裸鼠移植瘤生长。抑制FXR可使NSCLC细胞出现G0/G1期阻滞,而对细胞凋亡无明显影响。Western blot结果显示,抑制FXR可明显降低细胞周期蛋白cyclin D1和磷酸化Rb（phosphorylated Rb,p-Rb）的表达;相反,过表达FXR则促进cyclin D1和p-Rb的表达。采用特异性si RNA抑制SHP蛋白对细胞增殖和cyclin D1、p-Rb表达无明显影响,表明FXR对NSCLC细胞增殖和周期蛋白的调控不依赖SHP。3.Ch IP结果表明,FXR可与NSCLC细胞cyclin D1启动子IR-0区段直接结合。荧光素酶实验显示,FXR促进cyclin D1转录活性增强。除此之外,过表达cyclin D1可显着逆转FXR-si RNAs对细胞增殖和周期的抑制效应。免疫组化结果显示,肺癌组织中cyclin D1与FXR表达有显着正相关性（P<0.001）。Kaplan-Meier生存分析显示,cyclin D1和FXR均高表达的患者其总生存期最差（P=0.0077）。4.抑制FXR可促进NSCLC细胞表达PD-L1;相反,过表达FXR则降低PD-L1的表达。免疫组化结果显示,肺癌组织中PD-L1与FXR表达存在显着负相关（P<0.05）。小鼠黑色素瘤细胞S91表达mus FXR较高;采用特异性si RNA抑制mus FXR蛋白可显着促进mus PD-L1的表达。抑制SHP对NSCLC细胞表达PD-L1无明显影响,表明FXR对PD-L1的调控不依赖SHP。Ch IP结果表明,FXR可与PD-L1启动子直接结合。除此之外,FXR可通过抑制磷酸化EGFR（Tyr1068）进而降低PD-L1的表达。研究结论本研究首次系统探索了FXR在NSCLC中的表达和功能,发现FXR在NSCLC中表达增高,与不良预后密切相关,是独立的预后因子;FXR可通过直接转录激活周期蛋白cyclin D1,进而促进NSCLC细胞周期进展和肿瘤增生。除此之外,FXR可通过直接转录调控和影响磷酸化EGFR表达两种方式,负性调控肿瘤细胞表达PD-L1。本研究部分揭示了FXR在NSCLC发生发展中的生物学作用,提供了一个潜在预后指标和治疗靶点。
谢谦[10]（2016）在《Sirtuin蛋白在肿瘤发生和发展过程中的作用及机制研究》文中认为Sirtuin家族成员是一群在调节代谢、应激耐受、衰老及肿瘤中发挥重要作用的调控蛋白,其成员具有NAD+依赖性的蛋白去乙酰化酶、ADP-核糖转移酶等活性。目前虽对严重危害人类生命健康的肿瘤研究日渐深入,但因其发病及进展过程复杂,迄今为止人们对此仍缺乏全面和透彻的了解。肺癌和前列腺癌是男性中确诊最高的两类肿瘤。肺癌在全球范围内最为常见,而肺癌致死人数也位列第一。前列腺癌在发达国家男性中其发病率和病死率稳居前列,而在发展中国家包括中国其发病率近年来也逐步上升。对于肺癌及前列腺肿瘤的发生发展机制和有效治疗仍存在诸多尚未解决的问题。Sirtuin家族成员开始被发现在肿瘤形成及发生发展过程中起重要作用,但是相关研究依然有限,且缺乏Sirtuins在肺癌及前列腺癌的机制研究。在第一章中,从调控胞内代谢、修护DNA损伤及影响肿瘤微环境等方面及角度,简述Sirtuin蛋白家族成员SIRT1SIRT7在肿瘤发生发展过程中作用及功能的前期相关工作。不同Sirtuins可能在不同肿瘤发挥促癌或抑癌作用,而具体机制未明。在本论文后续三章的工作中,选择起促癌作用的SIRT6及抑癌作用的SIRT2进行具体阐述,并研究了可能调控Sirtuin的小分子药物Adjudin治疗肿瘤的潜力。在第三章中,我们使用前列腺癌的临床样本和细胞株研究了SIRT6蛋白在前列腺癌发生、发展过程中,特别是肿瘤转移过程中的作用。从前列腺癌标本的基因芯片数据分析发现SIRT6在前列腺癌转移过程中表达异常增高,而其高表达与患者预后生存率成负相关。临床样本和前列腺细胞中也发现SIRT6在转移的前列腺癌中高表达。敲除SIRT6可显着抑制前列腺癌细胞的转移和侵袭能力。同时还发现,调控SIRT6影响上皮间质转化过程关键蛋白和相关转录因子的表达。后续机制研究发现SIRT6可正调控Notch通路。Notch信号参与了SIRT6调控上皮间质转化转录因子Snail的活性,并在体外模型中验证了其影响前列腺癌细胞的转移和侵袭能力。在体内模型中也发现SIRT6能影响前列腺癌的增殖。在第四章中,具体研究SIRT2在非小细胞肺癌中的作用。本论文最先分析了非小细胞肺癌病人样本中SIRT2的表达情况,发现SIRT2在非小细胞肺癌中表达下调,并通过对肿瘤组织芯片染色验证了这个结果。在人非小细胞肺癌细胞株中过表达SIRT2可以阻滞细胞增殖、增加细胞凋亡并造成细胞周期停滞。后续的分析揭示SIRT2过表达可增加细胞自由基的产生和上调p27蛋白。初步结果提示SIRT2可能会调控非小细胞肺癌的上皮间质转化。在肿瘤治疗中,寻找更为有效且副作用较小的抗肿瘤药物一直是研究的热点。本论文发现男性避孕药Adjudin能在体内和体外对多种肿瘤细胞中具有杀伤效果。机制研究发现Adjudin可诱导Caspase-3依赖的肿瘤细胞凋亡。进一步的研究发现了Adjudin能改变细胞线粒体的结构和功能,影响线粒体质量和线粒体膜电位,使胞内ATP水平的下降。Adjudin联合其他化疗药物能带来更好的协同效果。综上所述,本论文对Sirtuin家族成员在肿瘤发生和发展过程的作用和“老药新用”治疗肿瘤等几个关键问题进行了较为详细的研究。这些研究为肿瘤治疗从基础向临床转化提供了新的思路和理论依据。
二、P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义（论文提纲范文）
（1）CMTM6表达促进肺癌增殖侵袭及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表(以字母顺序排列) |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 CMTM6在肺癌组织中的表达 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二章 敲低CMTM6对非小细胞肺癌生物学行为的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三章 CMTM6调节肺癌细胞增殖和侵袭的机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 含有MARVEL跨膜结构域的趋化素样因子6研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）长链非编码RNA MYU在肺腺癌中的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肺癌简介 |
| 1.1.1 肺癌概况 |
| 1.1.2 肺癌的治疗方法 |
| 1.2 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) |
| 1.2.1 非编码RNA及分类 |
| 1.2.2 lncRNA的分类及特性 |
| 1.2.3 lncRNA分子的功能 |
| 1.3 lncRNA与癌症 |
| 1.4 lncRNA与肺癌 |
| 1.4.1 lncRNA作为非小细胞肺癌的生物标志物 |
| 1.4.2 lncRNA调控非小细胞肺癌的生物学行为 |
| 1.5 lncRNA MYU |
| 1.6 本课题的研究内容及意义 |
| 第二章 MYU在肺腺癌中的表达及相关性研究 |
| 2.1 实验仪器、材料与试剂 |
| 2.1.1 样本收集 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 材料与试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 生物信息学分析 |
| 2.2.2 qRT-PCR检测MYU在肺腺癌组织中的表达量 |
| 2.2.3分子生物学实验 |
| 2.2.4 细胞复苏、培养 |
| 2.2.5 细胞传代 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 MYU在肺腺癌临床组织样本统计数据中高表达 |
| 2.3.2 MYU在肺腺癌组织及细胞中含量异常增高 |
| 2.3.3 组织样本情况 |
| 2.4 讨论与小结 |
| 第三章 敲减MYU对肺腺癌细胞增殖、迁移及周期凋亡的影响 |
| 3.1 实验仪器、材料与试剂 |
| 3.1.1 实验仪器 |
| 3.1.2 材料与试剂 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 溶液的配制 |
| 3.2.2 细胞复苏、传代 |
| 3.2.3 siRNA序列设计与合成 |
| 3.2.4 细胞转染及qRT-PCR实验 |
| 3.2.5 MTT实验 |
| 3.2.6 克隆形成实验 |
| 3.2.7 BrdU实验 |
| 3.2.8 细胞划痕实验 |
| 3.2.9 细胞周期实验 |
| 3.2.10 细胞凋亡实验 |
| 3.2.11 Western blot实验 |
| 3.2.12 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 敲减MYU可抑制肺腺癌细胞增殖能力 |
| 3.3.2 敲减MYU可抑制肺腺癌细胞迁移 |
| 3.3.3 敲减MYU可引起细胞周期阻滞并促进细胞凋亡 |
| 3.3.4 敲减MYU通过调控c-Myc及其周期相关的下游效应分子的表达诱导LUAD细胞周期阻滞 |
| 3.4 讨论与小结 |
| 第四章 MYU过表达对肺腺癌细胞增殖及迁移的影响 |
| 4.1 实验仪器、材料与试剂 |
| 4.1.1 实验仪器 |
| 4.1.2 材料与试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 目的基因的获取 |
| 4.2.2 过表达载体的构建 |
| 4.2.3 MYU过表达对细胞存活率及增殖能力的影响 |
| 4.2.4 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 MYU在肺腺癌细胞中成功过表达 |
| 4.3.2 MYU过表达促进肺腺癌细胞的增殖能力 |
| 4.3.3 MYU过表达促进肺腺癌细胞的迁移能力 |
| 4.4 讨论与小结 |
| 第五章 敲减MYU对小鼠体内肿瘤的影响 |
| 5.1 实验仪器、材料与试剂 |
| 5.1.1 实验仪器 |
| 5.1.2 材料与试剂 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 试剂配制 |
| 5.2.2 小鼠肿瘤模型的建立 |
| 5.2.3 制作石蜡切片 |
| 5.2.4 免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC) |
| 5.2.5 MYU定位 |
| 5.2.6 统计学分析 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 敲减MYU抑制了PC9 细胞在裸鼠体内的肿瘤生长 |
| 5.3.2 敲减MYU调控c-Myc及其周期相关的下游效应分子CDK6和p27蛋白的表达 |
| 5.3.3 MYU在肺腺癌细胞中主要定位于细胞核 |
| 5.4 讨论与小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 工作总结 |
| 6.2 工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间发表的学术论文及其他科研成果 |
（3）GRWD1通过激活Notch信号通路促进非小细胞肺癌增殖和迁移的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂、材料和实验仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要使用抗体 |
| 2.1.3 主要材料和细胞系 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 GRWD1在NSCLC中高表达且与不良预后相关 |
| 3.2 GRWD1可以促进非小细胞肺癌细胞的增殖能力 |
| 3.3 GRWD1可以促进非小细胞肺癌细胞的迁移能力 |
| 3.4 GRWD1可以促进非小细胞肺癌细胞的EMT发生 |
| 3.5 GRWD1可以激活非小细胞肺癌的Notch信号通路 |
| 3.6 GRWD1通过Notch信号通路影响非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移 |
| 4 讨论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）去泛素化酶USP49在非小细胞肺癌中的功能及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 USP49在非小细胞肺癌中的表达 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 结论 |
| 1.7 参考文献 |
| 第二部分 USP49通过阻断细胞周期抑制非小细胞肺癌的生长 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 2.7 参考文献 |
| 第三部分 USP49调控非小细胞肺癌中PI3K/AKT信号通路 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 结论 |
| 3.7 参考文献 |
| 第四部分 USP49通过抑制PTEN蛋白的多聚泛素化来稳定PTEN |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 结论 |
| 4.7 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 蛋白质的泛素化及其在非小细胞肺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文对照表 |
| 所发表的SCI论文 |
| 致谢 |
（5）miR-221在骨肉瘤细胞中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 miR-221在骨肉瘤细胞中的表达情况 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.参考文献 |
| 第二部分 miR-221抑制剂对骨肉瘤细胞的生物学行为的影响 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.参考文献 |
| 第三部分 miR-221在骨肉瘤细胞中的作用机制研究 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（6）Kpnβ1在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 第一部分 KPNB1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第二部分 KPNB1通过PI3K/AKT通路对非小细胞肺癌增殖能力的影响 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 在攻读博士学位期间公开发表的论文与参加的项目 |
| 致谢 |
（7）胆汁酸膜受体TGR5在非小细胞肺癌发病中的作用和临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一章 TGR5在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义探讨 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 小结 |
| 第二章 TGR5 对非小细胞肺癌增殖、周期、迁移等生物学行为的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 小结 |
| 第三章 TGR5 活化JAK2/STAT3 通路促进非小细胞肺癌细胞增殖、运动和肿瘤生长 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 小结 |
| 第四章 胆汁酸通过TGR5 受体发挥促癌作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结及下一步研究方向 |
| 结论 |
| 下一步研究方向 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
| 期刊论文 |
| 会议论文 |
（8）PRC1对非小细胞肺癌细胞增殖和周期的影响及潜在机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 胞质分裂调控蛋白 1（PRC1）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、细胞周期的影响及其与临床预后的相关性研究 |
| 材料与方法 |
| 1.主要仪器 |
| 2.主要试剂 |
| 3.非小细胞肺癌基因表达谱数据分析 |
| 4.非小细胞肺癌组织样本的采集 |
| 5.非小细胞肺癌细胞的来源、培养、传代、计数、冻存和复苏 |
| 6.非小细胞肺癌组织样本及细胞总RNA提取 |
| 7.逆转录及实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR）分析 |
| 8.Western blot |
| 9.质粒扩增、制备与提取 |
| 10.非小细胞肺癌细胞的质粒转染及siRNA转染 |
| 11.非小细胞肺癌细胞转染效果的鉴定 |
| 12.软琼脂细胞克隆形成实验：检测PRC1对非小细胞肺癌细胞增殖的影响 |
| 13.细胞transwell实验：检测PRC1对NSCLC细胞迁移能力的影响 |
| 14.流式细胞仪分析PRC1对非小细胞肺癌细胞周期的影响 |
| 15.免疫组织化学法 |
| 16.裸鼠皮下移植瘤实验 |
| 17.统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 PRC1（胞质分裂调控蛋白 1）影响非小细胞肺癌（NSCLC）细胞周期及增殖的潜在分子机制研究 |
| 材料与方法 |
| 1.主要仪器 |
| 2.主要试剂 |
| 3.非小细胞肺癌细胞的来源、培养、传代、计数、冻存和复苏 |
| 4.质粒扩增、制备与提取 |
| 5.非小细胞肺癌细胞的过表达质粒转染及siRNA转染 |
| 6.非小细胞肺癌细胞转染后效果鉴定 |
| 7.非小细胞肺癌细胞RNA提取 |
| 8.RNA样品逆转录及实时荧光定量PCR分析 |
| 9.免疫印迹试验（Western blot） |
| 10.细胞免疫荧光实验 |
| 11.CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖 |
| 12.统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 试剂及配置方法 |
| 部分缩略词表 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（9）FXR在非小细胞肺癌发病中的作用和临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一章 FXR在非小细胞肺癌中的表达及临床意义 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 小结 |
| 第二章 FXR在对非小细胞肺癌细胞增殖、周期和迁移的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 小结 |
| 第三章 非小细胞肺癌中FXR对 cyclin D1 的转录调控作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 小结 |
| 第四章 FXR对肿瘤细胞表达PD-L1 的影响及机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结及下一步研究方向 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
（10）Sirtuin蛋白在肿瘤发生和发展过程中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 Sirtuin蛋白在肿瘤发生和发展过程中作用前期研究综述 |
| 1.1 SIRT1:研究最详细的“多面手” |
| 1.2 SIRT2 |
| 1.3 线粒体Sirtuins:SIRT3、SIRT4和SIRT5 |
| 1.4 SIRT6,SIRT7 |
| 1.5 Sirtuins作为靶点的临床应用到底还有多远 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 主要材料 |
| 2.2 试剂与耗材 |
| 2.3 主要应用软件 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 数据分析 |
| 第三章 SIRT6 调控前列腺癌转移中的作用及机制的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 SIRT6 与前列腺癌的发生和发展有密切联系 |
| 3.2.2 SIRT6 调控上皮间质转化相关蛋白的表达 |
| 3.2.3 SIRT6 调控前列腺癌细胞的转移和侵袭 |
| 3.2.4 SIRT6 在转录及转录后层面调控Snail |
| 3.2.5 SIRT6 调控Notch信号通路 |
| 3.2.6 SIRT6 通过NICD调控上皮间质转化 |
| 3.2.7 初步结果揭示SIRT6 在体内模型中影响前列腺癌的转移 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 SIRT2 在非小细胞肺癌作用的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 .SIRT2 蛋白在非小细胞肺癌中表达水平下降 |
| 4.2.2 SIRT2 抑制非小细胞肺癌细胞的增殖 |
| 4.2.3 过表达SIRT2 诱导非小细胞肺癌细胞的凋亡 |
| 4.2.4 过表达SIRT2 促进非小细胞肺癌细胞ROS的产生 |
| 4.2.5 过表达SIRT2 导致肺癌细胞的G1 期阻滞 |
| 4.2.6 激活SIRT2 增加非小细胞肺癌细胞对顺铂的敏感性 |
| 4.2.7 使用SIRT2 激活剂Resveratrol可增加非小细胞肺癌细胞对顺铂的敏感性 |
| 4.2.8 初步结果提示SIRT2 能调控EMT相关蛋白的表达 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 老药新用治疗肿瘤:男性避孕药Adjudin是一个潜在的抗肿瘤药物 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 Adjudin抑制多种肿瘤细胞的增殖 |
| 5.2.2 Adjudin抑制A549和PC3 细胞的克隆形成 |
| 5.2.3 Adjudin诱导肿瘤细胞的凋亡 |
| 5.2.4 Adjudin影响肿瘤细胞的线粒体功能 |
| 5.2.5 Adjudin在体内模型中能减缓肺癌和前列腺癌的生长 |
| 5.2.6 Adjudin能增强肿瘤细胞对顺铂诱导的敏感性 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 全文总结 |
| 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 中英文缩写字母表 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
四、P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义（论文参考文献）
- [1]CMTM6表达促进肺癌增殖侵袭及机制研究[D]. 戴芳. 昆明医科大学, 2021(02)
- [2]长链非编码RNA MYU在肺腺癌中的功能及机制研究[D]. 徐涵. 江苏大学, 2020(02)
- [3]GRWD1通过激活Notch信号通路促进非小细胞肺癌增殖和迁移的研究[D]. 王琼梓. 中国医科大学, 2020(01)
- [4]去泛素化酶USP49在非小细胞肺癌中的功能及其机制的研究[D]. 沈文明. 苏州大学, 2019(06)
- [5]miR-221在骨肉瘤细胞中的作用及机制研究[D]. 胡晓晖. 苏州大学, 2019(04)
- [6]Kpnβ1在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究[D]. 王海英. 苏州大学, 2019(04)
- [7]胆汁酸膜受体TGR5在非小细胞肺癌发病中的作用和临床意义[D]. 刘雪青. 上海交通大学, 2018(01)
- [8]PRC1对非小细胞肺癌细胞增殖和周期的影响及潜在机制的研究[D]. 梁志刚. 苏州大学, 2017(04)
- [9]FXR在非小细胞肺癌发病中的作用和临床意义[D]. 游文杰. 上海交通大学, 2017(05)
- [10]Sirtuin蛋白在肿瘤发生和发展过程中的作用及机制研究[D]. 谢谦. 上海交通大学, 2016(06)